纳米抗体与小型蛋白支架文献周报

检索日期：2026年7月22日 覆盖时间：2026年7月15日 — 2026年7月22日（过去7天新收录文献） 检索数据库：PubMed (NCBI E-utilities API)检索式：基于用户指定检索策略，涵盖nanobody/VHH/FN3/affibody/DARPin/anticalin/knottin等 纳入标准：JCR Q1/Q2 或 SCI 1/2区期刊 | 以纳米抗体/小型蛋白支架为核心研究对象 排除标准：传统mAb/IgG/Fab/scFv为主线的研究 | FNDC5/irisin等天然蛋白 | 综述/评论/预印本（除非高质量期刊）

本周检索结果概览：PubMed检索命中40篇，经主题聚焦筛选后保留39篇，其中Q1/Q2高质量期刊文献30篇（A级推荐22篇，B级推荐7篇，C级推荐1篇），待核验文献9篇，排除主题不符文献1篇（光电化学免疫传感器，非纳米抗体/小型蛋白支架）。

一、本周高质量文献列表

二、逐篇文献解读

文献 1

英文题目： Tuning the Structural Properties of a Single-Domain Antibody Scaffold for Improved Fibroblast Activation Protein Targeting.中文题目：调控单域抗体支架结构特性以优化成纤维细胞激活蛋白靶向作者：Gallant Joseph P, Ott Kendahl L, Kwon Ohyun, et al.期刊：Molecular pharmaceutics (Mol Pharm)发表时间：PMID：42478500DOI：10.1021/acs.molpharmaceut.6c00238PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42478500/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：肿瘤治疗, 诊断/成像, 筛选平台/方法, 工程化/设计, 结构解析, 放射性配体治疗推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

Fibroblast activation protein (FAP) is an attractive target for the development of cancer theranostics due to its selective expression on cancer-associated fibroblasts (CAFs). While a number of small-molecule FAP inhibitors (FAPIs) have been developed, few biologics have been investigated as FAP-targeting vectors. Camelid-derived single-domain antibodies, or variable-heavy-heavy domains (VHHs), offer a compelling alternative, combining high affinity with versatile engineering options. In this study, we first identified a novel anti-FAP VHH, F7, from an affinity-matured camelid phage display library. To investigate how valency and molecular weight affected target engagement and in vivo properties, F7 was engineered into three formats: a monomer (F7), a tethered dimer (F7D), and an Fc-fusion protein (F7-Fc). All three were specific for FAP with the two bivalent constructs demonstrating picomolar affinity. Positron emission tomography imaging in FAP-positive xenograft models revealed distinct pharmacokinetic profiles across constructs, with notable differences in tumor uptake and clearance. F7 had rapid uptake and clearance, resulting in significantly higher tumor uptake than FAPI-46. Low molecular weight bivalent F7D demonstrated similar kinetics but was retained by the tumor, resulting in a high tumor-to-blood ratio with secondary uptake limited to clearance organs. The largest construct, F7-Fc, resulted in the highest tumor uptake and allowed for longitudinal imaging. Absorbed dose calculations confirmed that tumors received significantly higher radiation doses compared to normal tissues. These findings demonstrate that tuning VHH scaffold size and valency can improve biodistribution and retention, establishing F7-based constructs as promising targeting vectors for FAP.

2. 摘要中文翻译

成纤维细胞激活蛋白（FAP）因在肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）上选择性表达，是开发癌症诊疗一体化制剂的有吸引力的靶点。虽然已开发出多种小分子FAP抑制剂（FAPIs），但很少有生物制剂被研究用作FAP靶向载体。骆驼科来源的单域抗体或重链可变区（VHH）提供了一种引人注目的替代方案，兼具高亲和力和灵活的工程化选择。本研究首先从亲和力成熟的骆驼科噬菌体展示文库中鉴定了一种新型抗FAP VHH F7。为研究价态和分子量如何影响靶点结合和体内性质，F7被工程化为三种形式：单体（F7）、串联二聚体（F7D）和Fc融合蛋白（F7-Fc）。三种形式均对FAP特异，两种双价构建体表现出皮摩尔级亲和力。在FAP阳性异种移植模型中的正电子发射断层成像显示不同构建体具有独特的药代动力学特征，肿瘤摄取和清除存在显著差异。F7具有快速摄取和清除，肿瘤摄取显著高于FAPI-46。低分子量双价F7D表现出类似动力学，但被肿瘤保留，产生高肿瘤/血液比值，二次摄取仅限于清除器官。最大构建体F7-Fc产生最高肿瘤摄取并允许纵向成像。吸收剂量计算证实肿瘤接受的辐射剂量显著高于正常组织。这些发现证明，调节VHH支架大小和价态可改善生物分布和滞留，使基于F7的构建体成为FAP有前景的靶向载体。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为核心，聚焦FAP靶向的癌症治疗与诊断成像。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：肿瘤治疗、诊断/成像、放射性配体治疗主要方法：从骆驼科噬菌体展示文库筛选抗FAP VHH F7，构建单体、串联二聚体和Fc融合三种形式，通过PET成像评估体内药代动力学和肿瘤摄取。主要发现：双价VHH构建体达到皮摩尔亲和力；F7单体快速清除且肿瘤摄取高于小分子FAPI-46；F7D具有最佳肿瘤/血液比值；F7-Fc支持纵向成像。潜在优势：相比小分子FAPI，VHH可通过价态和分子量调控实现可定制的药代动力学和肿瘤滞留，为诊疗一体化提供更灵活的工程化平台。关注理由：该研究系统比较了VHH不同形式的体内行为，为FAP靶向放射性配体治疗的构建体设计提供了直接参考。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究通过系统比较抗FAP VHH单体、二聚体和Fc融合形式的体内药代动力学，证明调控VHH价态与分子量可显著优化肿瘤靶向与滞留，为FAP诊疗一体化提供了重要工程化策略。

文献 2

英文题目： An integrative multi-omics landscape of multi-dimensional cellular stress and metabolic reprogramming in melanoma treated with targeted alpha therapy.中文题目：靶向α治疗黑色素瘤的多维细胞应激与代谢重编程整合多组学图谱作者：Zhang Jiajia, Song Zhiling, Chen Zhengguo, et al.期刊：Journal of nanobiotechnology (J Nanobiotechnology)发表时间：PMID：42477740DOI：10.1186/s12951-026-04808-1PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42477740/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：肿瘤治疗, 细胞内靶向, 放射性配体治疗, 治疗应用推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

PURPOSE: This study aimed to elucidate the biological mechanisms underlying the therapeutic effects of targeted alpha therapy (TAT) using a novel 211At-labeled single-domain antibody drug ([211At]At-AuNP-sdAb). By integrating transcriptomic and metabolomic analyses, we sought to characterize the coordinated gene-metabolite responses induced by α-particle irradiation in melanoma models. METHODS: B16F10 melanoma cells and tumor-bearing mice were treated with [211At]At-AuNP-sdAb. RNA sequencing and untargeted LC-MS metabolomics were performed to identify differentially expressed genes and metabolites. Functional enrichment, OPLS-DA modeling, ROC curve analysis, and O2PLS-based multi-omics integration were used to explore the molecular networks and candidate indicators. RESULTS: [211At]At-AuNP-sdAb treatment significantly altered the transcription of 777 genes, revealing multi-dimensional cellular stress responses encompassing coordinated nuclear-cytoplasmic perturbations alongside downstream alterations in the mitochondrial respirasome and endoplasmic reticulum homeostasis. Untargeted metabolomic profiling revealed extensive metabolic reprogramming across amino acid, nucleotide, and lipid pathways, identifying key potential candidate indicators such as L-dihydroorotate, and Betaine. Furthermore, O2PLS integration successfully decoded robust multi-system covariance networks, wherein candidate distal metabolic nodes like glucosamine-6-phosphate demonstrated strong correlations with gene clusters regulating microenvironment remodeling. CONCLUSION: [211At]At-AuNP-sdAb induces multi-dimensional cellular stress and extensive metabolic reprogramming characterized by concurrent genomic damage, subcellular organelle perturbations, and microenvironmental remodeling. The decoded multi-omics covariance networks and specific candidate indicators provide a comprehensive molecular landscape of α-particle-induced biological responses, offering valuable candidate frameworks for monitoring and evaluating TAT therapeutic outcomes.

2. 摘要中文翻译

目的： 本研究旨在阐明使用新型211At标记单域抗体药物（[211At]At-AuNP-sdAb）进行靶向α治疗（TAT）的生物学机制。通过整合转录组学和代谢组学分析，表征α粒子照射在黑色素瘤模型中诱导的协调基因-代谢物反应。方法：用[211At]At-AuNP-sdAb处理B16F10黑色素瘤细胞和荷瘤小鼠。进行RNA测序和非靶向LC-MS代谢组学以鉴定差异表达基因和代谢物。使用功能富集、OPLS-DA建模、ROC曲线分析和基于O2PLS的多组学整合来探索分子网络和候选指标。结果：[211At]At-AuNP-sdAb处理显著改变了777个基因的转录，揭示了多维细胞应激反应，包括协调的核-细胞质扰动以及线粒体呼吸链复合体和内质网稳态的下游改变。非靶向代谢组学分析显示氨基酸、核苷酸和脂质途径的广泛代谢重编程，确定了L-二氢乳清酸和甜菜碱等关键潜在候选指标。此外，O2PLS整合成功解码了稳健的多系统协方差网络，其中葡糖胺-6-磷酸等候选远端代谢节点与调控微环境重塑的基因簇表现出强相关性。结论：[211At]At-AuNP-sdAb诱导多维细胞应激和广泛代谢重编程，特征为同时发生的基因组损伤、亚细胞细胞器扰动和微环境重塑。解码的多组学协方差网络和特定候选指标为α粒子诱导的生物学反应提供了全面的分子图谱，为监测TAT疗效提供了有价值的候选框架。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以单域抗体（sdAb）偶联的金纳米粒子介导的靶向α治疗为核心，聚焦黑色素瘤治疗机制。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：肿瘤治疗、放射性配体治疗主要方法：构建211At标记的AuNP-sdAb，通过转录组学和代谢组学整合分析B16F10黑色素瘤治疗后的分子响应。主要发现：TAT诱导777个基因差异表达，涉及核质扰动、线粒体呼吸链和内质网稳态改变；代谢重编程覆盖氨基酸、核苷酸和脂质通路；O2PLS整合识别了与微环境重塑相关的关键代谢节点。潜在优势：将纳米抗体靶向递送与α核素治疗结合，可通过多组学手段解析治疗机制，为疗效监测生物标志物发现提供基础。关注理由：该研究将纳米抗体放射性配体治疗与系统生物学结合，揭示了TAT的多维生物学效应，是该领域机制研究的重要补充。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究通过整合转录组学和代谢组学，系统描绘了211At标记单域抗体介导的靶向α治疗在黑色素瘤中的多维分子响应，为纳米抗体放射性药物的机制理解和疗效监测提供了新视角。

文献 3

英文题目： Pulmonary Delivery of Self-Amplifying RNA: Balancing Inflammation and Durable Transgene Expression.中文题目：自扩增RNA的肺部递送：平衡炎症与持久转基因表达作者：Sun Qing, Cui Xiaole, Li Haitao, et al.期刊：ACS nano (ACS Nano)发表时间：PMID：42469185DOI：10.1021/acsnano.6c00709PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42469185/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：药物递送, 感染性疾病, 工程化/设计, 治疗应用推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

Self-amplifying mRNA (saRNA) is emerging as a leading platform for both vaccination and gene therapy. However, saRNA and the lipid nanoparticles (LNPs) used for their delivery activate the innate immune system, which may complicate pulmonary delivery of saRNA-LNPs. In this study, we demonstrated that intratracheal administration of saRNA-LNPs can cause significant side effects that can be linked to innate immune cell recruitment and cytokine release in the lungs. However, through systematic optimization of the LNP formulation and the saRNA dose, we could restrict the inflammation in the lungs to an acceptable level. With these optimized saRNA-LNPs, high levels of transgene expression were achieved in the lungs of mice that lasted for at least 21 days. Moreover, intratracheal delivery of optimized saRNA-LNPs encoding SARS-CoV-2 nanobodies resulted in detectable nanobody levels in the lungs.

2. 摘要中文翻译

自扩增mRNA（saRNA）正成为疫苗接种和基因治疗的重要平台。然而，saRNA及其递送用脂质纳米颗粒（LNPs）会激活先天免疫系统，这可能使saRNA-LNPs的肺部递送复杂化。本研究表明，saRNA-LNPs的气管内给药可引起显著副作用，与肺部先天免疫细胞募集和细胞因子释放相关。然而，通过系统优化LNP配方和saRNA剂量，可将肺部炎症限制在可接受水平。使用优化后的saRNA-LNPs，在小鼠肺部实现了高水平的转基因表达，持续至少21天。此外，编码SARS-CoV-2纳米抗体的优化saRNA-LNPs气管内递送后，在肺部可检测到纳米抗体水平。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为报告分子/治疗载荷，聚焦saRNA-LNP肺部递送平台的优化。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：药物递送、感染性疾病、基因治疗主要方法：优化LNP配方和saRNA剂量，通过气管内给药实现肺部持久转基因表达，并以SARS-CoV-2纳米抗体作为表达报告。主要发现：未优化saRNA-LNP引起肺部炎症；优化后炎症可控且转基因表达持续≥21天；编码SARS-CoV-2纳米抗体的saRNA可在肺部产生可检测纳米抗体。潜在优势：saRNA可在低剂量下实现持久蛋白表达，LNP肺部递送为局部产生治疗性纳米抗体提供了非病毒载体策略。关注理由：该研究展示了通过saRNA-LNP在肺部原位表达抗病毒纳米抗体的概念验证，为呼吸道感染预防和治疗提供了新递送思路。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究通过优化saRNA-LNP肺部递送系统，在控制炎症的同时实现了SARS-CoV-2纳米抗体的局部持久表达，为呼吸道疾病的原位抗体治疗提供了新平台。

文献 4

英文题目： Programmable Nanobody-Targeting Chimeras Enable Intracellular Viral Protein Degradation.中文题目：可编程纳米抗体靶向嵌合体实现细胞内病毒蛋白降解作者：Pan Max Yu-Chen, Lee Ting-Hui, Peng Tzu-Ning, et al.期刊：Advanced science (Weinheim, Baden-Wurttemberg, Germany) (Adv Sci (Weinh))发表时间：PMID：42467897DOI：10.1002/advs.76687PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42467897/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：OA（PMC全文）PMC ID：PMCPMC13379255PMC 全文链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMCPMC13379255/支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：感染性疾病, 细胞内靶向, 筛选平台/方法, 工程化/设计, 治疗应用推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

Chronic hepatitis B virus (HBV) infection remains a major global health challenge, largely because current antiviral therapies seldom achieve sustained clearance of the viral surface antigen (HBsAg), a central driver of immune tolerance and viral persistence. Here, we present a programmable, nanobody-based targeted protein degradation platform, termed Nanobody-Targeting Chimera (Nab-TAC), designed for the intracellular clearance of HBV antigens. To systematically identify functional degradation modules, we developed a split-luciferase complementation-based quantitative screening platform that benchmarks degron motifs and proximity-inducing effectors, enabling comprehensive ranking of proteasome- and lysosome-targeting elements across diverse cellular contexts and subcellular compartments. By coupling phage display-derived nanobodies and single-chain variable fragments with these optimized degradation modules, we engineered a panel of Nab-TAC constructs that efficiently degrade viral HBsAg in hepatocytes. Notably, the lead construct, E3-FCGR3B, achieved robust intrahepatic antigen clearance and markedly reduced circulating HBsAg levels in an HBV hydrodynamic injection mouse model. Together, these findings establish Nab-TAC as a modular and versatile platform for targeted antiviral protein degradation and highlight its potential as a therapeutic strategy toward a functional cure for chronic HBV infection.

2. 摘要中文翻译

慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染仍是重大全球健康挑战，很大程度上因为当前抗病毒治疗很少能持续清除病毒表面抗原（HBsAg），这是免疫耐受和病毒持续存在的核心驱动因素。本研究提出了一种可编程的、基于纳米抗体的靶向蛋白降解平台，称为纳米抗体靶向嵌合体（Nab-TAC），旨在实现HBV抗原的胞内清除。为系统鉴定功能降解模块，开发了一种基于分裂荧光素酶互补的定量筛选平台，用于基准测试degron基序和 proximity-inducing effectors，能够在不同细胞环境和亚细胞区室中全面排序蛋白酶体和溶酶体靶向元件。通过将噬菌体展示来源的纳米抗体和单链可变片段与这些优化的降解模块偶联，工程化了一系列Nab-TAC构建体，可在肝细胞中有效降解病毒HBsAg。值得注意的是，先导构建体E3-FCGR3B在HBV水动力注射小鼠模型中实现了强效的肝内抗原清除，并显著降低循环HBsAg水平。这些发现共同确立了Nab-TAC作为一种模块化和通用化的靶向抗病毒蛋白降解平台，并突显了其作为慢性HBV感染功能性治愈治疗策略的潜力。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为核心，构建靶向蛋白降解嵌合体（Nab-TAC），用于慢性HBV感染治疗。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：感染性疾病、细胞内靶向、靶向降解主要方法：开发分裂荧光素酶互补筛选平台优化降解模块；将抗HBsAg纳米抗体与E3泛素连接酶等效应子融合构建Nab-TAC；在肝细胞和HBV小鼠模型中验证。主要发现：Nab-TAC可高效降解肝细胞内HBsAg；先导构建体E3-FCGR3B在动物模型中显著降低血清HBsAg。潜在优势：相比传统抗病毒药物仅抑制病毒复制，Nab-TAC可直接清除病毒抗原，有望实现功能性治愈；纳米抗体可靶向胞内抗原并介导蛋白降解。关注理由：该研究将纳米抗体与靶向蛋白降解技术结合，开创了Nab-TAC新平台，对HBV等功能性治愈和细胞内靶点药物开发具有重要启示。

4. 全文精读分析

研究背景：慢性HBV感染难以治愈，主要因cccDNA持续存在和HBsAg介导的免疫耐受。现有核苷类似物和干扰素难以清除HBsAg。核心科学问题：如何利用纳米抗体将HBsAg等病毒蛋白靶向至蛋白酶体或溶酶体进行降解？支架选择逻辑：纳米抗体可识别HBsAg等病毒抗原，小尺寸便于胞内递送和与降解模块融合，且可通过噬菌体展示快速筛选。筛选与设计路线：构建分裂荧光素酶互补系统筛选degron和效应子；噬菌体展示筛选抗HBsAg纳米抗体；设计不同亚细胞定位的Nab-TAC；体外和体内验证降解效率。关键实验和证据链：HBsAg降解 Western blot；共聚焦验证共定位；HBV水动力注射小鼠模型检测血清HBsAg和肝内抗原。关键数据：E3-FCGR3B显著降低循环HBsAg；多构建体实现肝细胞内HBsAg清除。主要结论：Nab-TAC是模块化、可编程的抗病毒蛋白降解平台，为慢性HBV功能性治愈提供新策略。创新点：首次将纳米抗体用于构建靶向病毒蛋白的PROTAC-like嵌合体；建立分裂荧光素酶互补筛选平台优化降解元件。局限性：长期安全性、脱靶效应、纳米抗体的胞内递送效率和在临床样本中的效果需进一步验证。启发：Nab-TAC平台可扩展至其他病毒或胞内致病蛋白的靶向降解。

5. 一句话评价

该研究开发了基于纳米抗体的靶向蛋白降解平台Nab-TAC，在HBV模型中有效清除HBsAg，为慢性乙肝功能性治愈和细胞内靶点降解提供了创新策略。

文献 5

英文题目： Non-Armored GCC-targeting CAR-T cell therapy demonstrates significant efficacy in patients with advanced colorectal cancer.中文题目：非装甲GCC靶向CAR-T细胞治疗在晚期结直肠癌患者中显示出显著疗效作者：Zhang Qianyu, Lin Lin, Wang Wei, et al.期刊：Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research (Clin Cancer Res)发表时间：PMID：42467218DOI：10.1158/1078-0432.CCR-26-0854PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42467218/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：肿瘤治疗, CAR/细胞治疗, 工程化/设计, 治疗应用推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

PURPOSE: This phase 1 clinical trial aims to evaluate the safety, expansion kinetics, and preliminary efficacy of non-armored, nanobody-derived GCC-targeted CAR-T cells in patients with heavily pretreated, metastatic colorectal cancer. PATIENTS AND METHODS: In this single-arm, open-label, phase 1 clinical trial, twenty-four patients who received at least two prior lines of treatment received GCC-targeted CAR-T cells across four dose levels: 0.5×105, 1×106, 2×106,and 3×106 CAR-T cells/kg. The primary endpoint was safety; secondary endpoints included antitumor activity and pharmacokinetics. RESULTS: All patients experienced grade 3 or higher hematologic toxicity, and 75% developed cytokine release syndrome, both of which were generally manageable. Two treatment-related deaths occurred, one due to immune effector cell-associated hemophagocytic lymphohistiocytosis-like syndrome and one due to intestinal fistula following rapid tumor regression in a lesion adherent to the intestinal wall. The overall response rate (ORR) and disease control rate (DCR) reached 33% and 63%, respectively. Eight patients achieved a partial response (PR) as their best response, seven maintained stable disease (SD), and five had progressive disease (PD). Median progression-free survival (mPFS) was 57 days and median overall survival (mOS) was 190 days. Higher in vivo CAR-T expansion was associated with better disease control. Proof-of-concept activity was demonstrated, although response durability was limited and toxicity remains challenging. CONCLUSIONS: GCC-targeted CAR-T cells demonstrated encouraging antitumor activity in heavily pretreated CRC patients, with the initial data supporting GCC as a clinically actionable target. Further development will require dose selection, patient eligibility, and toxicity management optimization to improve the therapeutic profile.

2. 摘要中文翻译

目的： 本I期临床试验旨在评估非装甲、纳米抗体来源的GCC靶向CAR-T细胞在经多线治疗的转移性结直肠癌患者中的安全性、扩增动力学和初步疗效。患者与方法：在这项单臂、开放标签的I期临床试验中，24名接受过至少两线治疗的患者接受了四个剂量水平的GCC靶向CAR-T细胞：0.5×10^5、1×10^6、2×10^6和3×10^6 CAR-T细胞/kg。主要终点是安全性；次要终点包括抗肿瘤活性和药代动力学。结果：所有患者均经历3级或更高血液学毒性，75%发生细胞因子释放综合征，两者通常可控。发生2例治疗相关死亡，1例因免疫效应细胞相关噬血细胞性淋巴组织细胞增多症样综合征，1例因肿瘤快速消退后肠瘘。总缓解率（ORR）和疾病控制率（DCR）分别达到33%和63%。8例患者达到部分缓解（PR），7例维持疾病稳定（SD），5例出现疾病进展（PD）。中位无进展生存期（mPFS）为57天，中位总生存期（mOS）为190天。体内CAR-T扩增越高与更好的疾病控制相关。概念验证活性已得到证实，尽管反应持久性有限且毒性仍具挑战性。结论：GCC靶向CAR-T细胞在经多线治疗的CRC患者中显示出令人鼓舞的抗肿瘤活性，初步数据支持GCC作为临床可操作的靶点。进一步开发需要优化剂量选择、患者资格和毒性管理以改善治疗特征。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）来源的CAR-T细胞为核心，聚焦晚期结直肠癌的临床治疗。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：肿瘤治疗、CAR/细胞治疗主要方法：I期临床试验，24例经多线治疗的转移性结直肠癌患者接受GCC靶向纳米抗体CAR-T细胞治疗，评估安全性和疗效。主要发现：ORR 33%，DCR 63%；血液学毒性和CRS可控；2例治疗相关死亡；高CAR-T扩增与更好疾病控制相关。潜在优势：纳米抗体CAR-T结构紧凑，可靶向GCC等实体瘤抗原；为非装甲CAR-T在实体瘤中的概念验证提供了临床数据。关注理由：这是纳米抗体CAR-T在实体瘤中为数不多的早期临床数据，对实体瘤细胞治疗具有重要参考价值。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该I期临床试验首次证明纳米抗体来源的GCC靶向CAR-T在经多线治疗的转移性结直肠癌中具有概念验证活性，但毒性和反应持久性仍是关键挑战。

文献 6

英文题目： Engineered Escherichia coli Nissle 1917 secreting anti-TNF-α nanobody as a single-strain live biotherapeutic for inflammatory bowel disease.中文题目：工程化大肠杆菌Nissle 1917分泌抗TNF-α纳米抗体作为炎症性肠病的单菌株活体生物治疗药物作者：Zhu Qiumei, Feng Shitao, Yan Zhende, et al.期刊：Frontiers in immunology (Front Immunol)发表时间：PMID：42465743DOI：10.3389/fimmu.2026.1865862PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42465743/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：OA（PMC全文）PMC ID：PMCPMC13372642PMC 全文链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMCPMC13372642/支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：肿瘤治疗, 感染性疾病, 工程化/设计, 结构解析, 治疗应用推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

BACKGROUND: The rising global incidence of inflammatory bowel disease (IBD) creates an urgent need for safer, gut-targeted therapies. Current treatments, from small-molecule drugs to systemic anti-tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) biologics, are frequently limited by off-target immunosuppression, heightened infection risk, and poor mucosal bioavailability. Engineered probiotic-based live biotherapeutics offer a compelling alternative by enabling localized drug production within the inflamed intestine. METHODS: We engineered Escherichia coli Nissle 1917 (EcN) to secrete the anti-TNF-α nanobody MT1, creating the streamlined, single-strain platform EcN-MT1. Five signal peptides were screened, and plasmid-based and CRISPR-Cas9-mediated chromosomal integration strategies were compared. Structural modeling and molecular dynamics simulated MT1-murine TNF-α (mTNF-α) binding. Binding affinity and anti-inflammatory activity were assessed by ELISA and in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW264.7 macrophages. Therapeutic efficacy was further evaluated in a dextran sulfate sodium (DSS)-induced murine colitis model by assessing body weight, disease activity index (DAI), colon length, histopathology, colonic pro-inflammatory cytokines, and 16S rRNA gut microbiota profiling. RESULTS: Among the tested signal peptides, α-hemolysin (HlyA) achieved highest secretion (4.6 mg/L), and the plasmid-based strain markedly outperformed genomic integrants without impairing growth. Simulations confirmed stable complementarity-determining regions (CDR)-mediated binding, consistent with the high affinity (EC50 27.9 nM) and potent suppression of LPS-induced mRNA expression of Tnf and interleukin-1β (Il1b) in macrophages. In the DSS-induced murine colitis model, oral administration of EcN-MT1 significantly attenuated weight loss, improved DAI scores, and preserved colon length. Histopathological analysis revealed reduced mucosal ulceration, crypt loss, and immune cell infiltration, accompanied by downregulated colonic Tnf and Il1b mRNA. Notably, EcN-MT1 treatment restored gut microbial diversity, corrected dysbiosis, and enriched beneficial taxa linked to butyrate production, barrier enhancement, and anti-inflammatory effects. CONCLUSION: This study establishes EcN-MT1 as a potent, orally deliverable live biotherapeutic that achieves localized TNF-α neutralization while concurrently promoting microbial and mucosal homeostasis, offering a novel and translatable strategy for IBD treatment.

2. 摘要中文翻译

背景： 炎症性肠病（IBD）全球发病率上升，迫切需要更安全、肠道靶向的治疗方法。当前治疗从小分子药物到全身性抗TNF-α生物制剂，常受限于脱靶免疫抑制、感染风险增加和黏膜生物利用度差。工程化益生菌活体生物治疗药物通过在发炎肠道内局部产药提供了引人注目的替代方案。方法：我们工程化大肠杆菌Nissle 1917（EcN）分泌抗TNF-α纳米抗体MT1，创建了简化的单菌株平台EcN-MT1。筛选了五种信号肽，并比较了质粒和CRISPR-Cas9介导的染色体整合策略。通过结构建模和分子动力学模拟MT1-小鼠TNF-α（mTNF-α）结合。通过ELISA和LPS刺激的RAW264.7巨噬细胞评估结合亲和力和抗炎活性。进一步在葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠结肠炎模型中通过体重、疾病活动指数（DAI）、结肠长度、组织病理学、结肠促炎细胞因子和16S rRNA肠道微生物群分析评估治疗效果。结果：在测试的信号肽中，α-溶血素（HlyA）实现最高分泌（4.6 mg/L），质粒菌株显著优于基因组整合子且不影响生长。模拟证实了稳定的互补决定区（CDR）介导的结合，与高亲和力（EC50 27.9 nM）和强力抑制LPS诱导的Tnf和Il1b mRNA表达一致。在DSS诱导的小鼠结肠炎模型中，口服EcN-MT1显著减轻体重下降、改善DAI评分并保留结肠长度。组织病理学分析显示黏膜溃疡、隐窝丢失和免疫细胞浸润减少。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为核心，工程化益生菌EcN作为IBD活体生物治疗药物。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：免疫治疗、肿瘤治疗、治疗应用主要方法：将抗TNF-α纳米抗体MT1分泌表达于EcN，优化信号肽和表达策略，在DSS结肠炎小鼠模型中评估疗效。主要发现：HlyA信号肽实现最高分泌（4.6 mg/L）；EcN-MT1高亲和力中和mTNF-α（EC50 27.9 nM）；口服给药显著改善结肠炎症状和组织病理。潜在优势：益生菌可在肠道局部持续产生抗TNF-α纳米抗体，避免全身给药的免疫抑制和感染风险，提高黏膜靶向性。关注理由：该研究将纳米抗体与工程化益生菌结合，为IBD等慢性炎症性疾病的局部治疗提供了创新活体生物治疗策略。

4. 全文精读分析

研究背景：IBD传统治疗包括氨基水杨酸、免疫抑制剂和抗TNF-α抗体，但全身性抗TNF治疗存在感染和肿瘤风险。局部、肠道靶向的抗TNF递送是研究热点。核心科学问题：能否利用工程化益生菌在肠道原位分泌抗TNF-α纳米抗体以治疗IBD？支架选择逻辑：纳米抗体小尺寸、易于在原核生物中表达和分泌，适合作为益生菌递送的抗炎蛋白载荷；TNF-α是IBD关键炎症因子。筛选与设计路线：筛选信号肽优化MT1分泌；比较质粒与染色体整合表达策略；分子动力学模拟验证结合；DSS结肠炎模型评估疗效。关键实验和证据链：ELISA测定分泌水平和亲和力；巨噬细胞炎症因子抑制实验；小鼠结肠炎模型体重、DAI、结肠长度、组织病理、细胞因子和微生物群分析。关键数据：HlyA信号肽分泌4.6 mg/L；EC50 27.9 nM；显著改善体重下降、DAI和结肠长度。主要结论：EcN-MT1可在肠道局部分泌抗TNF-α纳米抗体，有效缓解DSS诱导的结肠炎。创新点：将纳米抗体与益生菌活体生物治疗结合，实现肠道局部抗炎治疗。局限性：小鼠模型与人体IBD病理差异；长期使用EcN的安全性、定植和免疫原性需评估。启发：为IBD、类风湿关节炎等自身免疫病的局部生物治疗提供了新思路，可扩展至其他纳米抗体-益生菌组合。

5. 一句话评价

该研究工程化益生菌EcN原位分泌抗TNF-α纳米抗体，在结肠炎模型中显著改善疾病指标，为IBD的肠道靶向活体生物治疗开辟了新途径。

文献 7

英文题目： Multiparatopic antibodies overcome tyrosine kinase inhibitor resistance by inducing lysosomal degradation of EGFR mutants.中文题目：多表位抗体通过诱导溶酶体降解克服酪氨酸激酶抑制剂耐药性作者：Lin Chunjie, Liu Jie, Ni Jiacheng, et al.期刊：Oncogene (Oncogene)发表时间：PMID：42463770DOI：10.1038/s41388-026-03901-xPubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42463770/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：肿瘤治疗, 靶向降解, 细胞内靶向, 筛选平台/方法, 工程化/设计, 治疗应用推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

Acquired resistance to epidermal growth factor receptor (EGFR) tyrosine kinase inhibitors (TKIs) remains a major challenge in the treatment of non-small cell lung cancer (NSCLC). To address this issue, we developed a novel therapeutic strategy based on multiparatopic antibodies that induce targeted degradation of EGFR, independent of driver mutations typically residing in the cytosolic domain. We engineered nanobodies (Nbs) recognizing four distinct epitopes within the EGFR extracellular domain into biparatopic and triparatopic antibody formats. These antibodies effectively promoted EGFR clustering, endocytosis, and lysosomal degradation, resulting in potent suppression of downstream signaling and cell proliferation in NSCLC cell lines carrying diverse EGFR mutations, including those resistant to osimertinib. The degradation process was epitope-dependent and mediated through a dynamin-dependent endocytic pathway. Triparatopic antibodies exhibited superior antitumor efficacy compared to both biparatopic antibodies and osimertinib in xenograft models of TKI-sensitive and TKI-resistant NSCLC cells. Moreover, these antibodies displayed additive effects when combined with osimertinib. We further demonstrated that this degradation mechanism extends beyond EGFR, as antibody-mediated crosslinking similarly triggered PD-L1 degradation. Collectively, this study indicates multiparatopic antibodies as a potent and mechanistically distinct strategy to overcome TKI resistance by directly degrading the target oncoprotein, with broad applicability to other pathogenic cell surface proteins.

2. 摘要中文翻译

表皮生长因子受体（EGFR）酪氨酸激酶抑制剂（TKI）的获得性耐药仍是非小细胞肺癌（NSCLC）治疗的主要挑战。为解决这一问题，我们开发了一种基于多表位抗体诱导EGFR靶向降解的新型治疗策略，不依赖于通常位于胞质域的驱动突变。我们将识别EGFR胞外域四个不同表位的纳米抗体工程化为双表位和三表位抗体形式。这些抗体有效促进EGFR聚集、内吞和溶酶体降解，在携带多种EGFR突变的NSCLC细胞系中强效抑制下游信号传导和细胞增殖，包括对奥希替尼耐药的突变。降解过程具有表位依赖性，并通过dynamin依赖的内吞途径介导。在TKI敏感和TKI耐药NSCLC异种移植模型中，三表位抗体表现出优于双表位抗体和奥希替尼的抗肿瘤疗效。此外，当与奥希替尼联合使用时，这些抗体显示出相加效应。我们进一步证明该降解机制超越EGFR，因为抗体介导的交联同样触发了PD-L1降解。总之，本研究表明多表位抗体是一种强效且机制独特的策略，通过直接降解靶点癌蛋白克服TKI耐药，并具有广泛的适用性用于其他致病性细胞表面蛋白。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为基础构建多表位抗体，用于诱导EGFR溶酶体降解以克服NSCLC TKI耐药。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：肿瘤治疗、靶向降解主要方法：筛选识别EGFR胞外域四个表位的纳米抗体，构建双表位和三表位抗体，验证其诱导EGFR内吞、溶酶体降解和抗肿瘤活性。主要发现：多表位抗体可诱导EGFR聚集和溶酶体降解，克服多种EGFR突变（包括奥希替尼耐药）驱动的增殖；三表位抗体体内疗效优于奥希替尼；机制可扩展至PD-L1降解。潜在优势：不依赖胞内驱动突变，直接通过抗体交联诱导受体降解，可绕过传统TKI耐药机制。关注理由：该研究提出多表位抗体诱导受体降解的新机制，为克服EGFR TKI耐药提供了不依赖小分子抑制剂的替代策略。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究利用多表位纳米抗体交联诱导EGFR溶酶体降解，在TKI耐药NSCLC模型中展现出优于奥希替尼的抗肿瘤活性，为克服靶向治疗耐药提供了新机制。

文献 8

英文题目： Cell-Selective Delivery of RIBOTACs via an Anti-EGFR Nanobody for Pancreatic Cancer Treatment.中文题目：通过抗EGFR纳米抗体实现RIBOTAC的细胞选择性递送用于胰腺癌治疗作者：Luo Tianli, Wang Yijuan, Chen Dengwang, et al.期刊：Advanced science (Weinheim, Baden-Wurttemberg, Germany) (Adv Sci (Weinh))发表时间：PMID：42460642DOI：10.1002/advs.76575PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42460642/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：OA（PMC全文）PMC ID：PMCPMC13373894PMC 全文链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMCPMC13373894/支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：肿瘤治疗, 靶向降解, 工程化/设计, 治疗应用推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) remains a therapeutic challenge due to its dense stroma and lack of druggable targets. Through integrated bioinformatics analysis of in-house and public datasets, we systematically identified miR-21 as the most significantly upregulated oncomiR in PDAC, showing strong correlation with poor patient prognosis. RNA-targeted degradation has emerged as a promising strategy for cancer treatment, enabling precise disruption of oncogenic signaling by degrading disease-driving non-coding RNAs. Nevertheless, poor tissue penetration and insufficient tumor specificity limit its therapeutic potential in pancreatic cancer, owing to the dense fibrotic stroma and heterogeneous target expression. Herein, we developed a dual-targeting, bioresponsive Nb-RIBOTAC (Nb-Fc-Val-Cit-RIBOTAC), engineered by conjugating a cathepsin B-responsive linker to bridge an EGFR-targeting nanobody (Nb-Fc fusion) with a miR-21-specific RIBOTAC module. This rationally designed therapeutic achieved potent and selective miR-21 degradation in orthotopic PDAC models, with 60% target knockdown while completely sparing normal tissues, leading to significant tumor growth inhibition. Our study establishes a transformative paradigm bridging bioinformatic identification with precision RNA degradation technology, offering new therapeutic possibilities for PDAC treatment. The target selection strategy and modular design principles described herein may be broadly applicable to other challenging malignancies.

2. 摘要中文翻译

胰腺导管腺癌（PDAC）因其致密基质和缺乏可成药靶点而仍是治疗挑战。通过整合内部和公共数据集的生物信息学分析，我们系统鉴定miR-21为PDAC中最显著上调的致癌miRNA，与患者预后不良强相关。RNA靶向降解已成为癌症治疗的有前景策略，可通过降解疾病驱动的非编码RNA精确破坏致癌信号。然而，由于致密纤维化基质和异质性靶点表达，组织穿透不足和肿瘤特异性不够限制了其在胰腺癌中的治疗潜力。本研究开发了一种双靶向、生物响应性Nb-RIBOTAC（Nb-Fc-Val-Cit-RIBOTAC），通过组织蛋白酶B响应性连接子将EGFR靶向纳米抗体（Nb-Fc融合）与miR-21特异性RIBOTAC模块桥接。这种合理设计的治疗药物在 orthotopic PDAC模型中实现了强效且选择性的miR-21降解，靶点敲低达60%同时完全 sparing正常组织，显著抑制肿瘤生长。本研究建立了将生物信息学鉴定与精确RNA降解技术相结合的变革性范式，为PDAC治疗提供了新的治疗可能性。本文描述的目标选择策略和模块化设计原则可广泛适用于其他挑战性恶性肿瘤。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为核心，构建双靶向、生物响应性Nb-RIBOTAC用于胰腺癌的RNA靶向降解治疗。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：肿瘤治疗、靶向降解、药物递送主要方法：生物信息学鉴定miR-21为PDAC关键致癌miRNA；设计EGFR靶向纳米抗体-Fc与miR-21 RIBOTAC通过组织蛋白酶B响应性连接子偶联；在PDAC模型中验证。主要发现：Nb-RIBOTAC在PDAC中实现60% miR-21敲低，正常组织无影响，显著抑制肿瘤生长。潜在优势：纳米抗体提供EGFR靶向性和肿瘤穿透，组织蛋白酶B响应释放实现肿瘤特异性激活，RIBOTAC降解致癌miRNA。关注理由：该研究将纳米抗体递送、肿瘤微环境响应释放和RNA降解三种技术整合，为PDAC等难治肿瘤提供了模块化治疗新范式。

4. 全文精读分析

研究背景：PDAC缺乏有效靶向治疗，KRAS等靶点难以成药。miR-21在PDAC中高表达且与预后不良相关，是潜在靶点。但RNA药物组织穿透和特异性差。核心科学问题：如何利用EGFR靶向纳米抗体将miR-21 RIBOTAC特异性递送至PDAC细胞并实现肿瘤微环境响应释放？支架选择逻辑：EGFR在PDAC中高表达；纳米抗体-Fc兼具靶向性和较长半衰期；组织蛋白酶B在肿瘤微环境中高表达，可用于连接子切割。筛选与设计路线：生物信息学筛选PDAC关键miRNA；设计并合成Nb-Fc-Val-Cit-RIBOTAC；体外验证EGFR结合、组织蛋白酶B响应释放和miR-21降解；原位PDAC模型评估抗肿瘤活性。关键实验和证据链：qPCR检测miR-21降解；Western blot评估下游信号；细胞毒性实验；原位肿瘤模型影像学和组织学分析。关键数据：miR-21敲低60%；正常组织无降解；显著肿瘤生长抑制。主要结论：Nb-RIBOTAC通过EGFR靶向和组织蛋白酶B响应释放，实现PDAC特异性miR-21降解和抗肿瘤疗效。创新点：首个将纳米抗体与RIBOTAC结合用于PDAC治疗的研究；整合生物信息学靶点发现和模块化药物设计。局限性：长期毒性、脱靶RNA降解、人源化纳米抗体和临床转化可行性需进一步验证。启发：该平台可推广至其他肿瘤相关miRNA或RNA靶点的靶向降解。

5. 一句话评价

该研究开发了EGFR靶向纳米抗体介导的肿瘤响应性RIBOTAC递送系统，在胰腺癌模型中实现选择性miR-21降解和显著抑瘤效果，为难治肿瘤提供了模块化RNA药物递送新策略。

文献 9

英文题目： A NANOBODY molecule that blocks MerTK ectodomain cleavage in vitro and in vivo.中文题目：一种可在体外和体内阻断MerTK胞外域切割的纳米抗体分子作者：Duprez Linde, Kilic Ayse, Bruwiere Hélène, et al.期刊：mAbs (MAbs)发表时间：PMID：42459154DOI：10.1080/19420862.2026.2704449PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42459154/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：OA（PMC全文）PMC ID：PMCPMC13378718PMC 全文链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMCPMC13378718/支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：基础研究/其他推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

The membrane receptor MerTK is critical for the resolution of inflammation and thus is of pharmacological interest. MerTK function is inhibited by the proteolytic cleavage of its extracellular domain leading to the formation of soluble Mer (sMer). We describe here the NANOBODY molecule A0445046C08 and its half-life-extended version A044500050. Both bound selectively to MerTK and blocked lipopolysaccharide-induced MerTK cleavage in primary macrophages without influencing ligand binding or kinase activity of MerTK. A044500050 reduced Zymosan-induced sMer levels in the peritoneal lavage fluid of a mouse model with sterile peritonitis. The study demonstrates that NANOBODY molecules can be generated that selectively inhibit ectodomain shedding and outlines a novel pharmacological approach for targeting membrane proteins where aberrant cleavage plays a pathogenic role.

2. 摘要中文翻译

膜受体MerTK对炎症消退至关重要，因此具有药理学意义。MerTK功能被其胞外域的蛋白水解切割抑制，导致可溶性Mer（sMer）形成。本文描述了纳米抗体分子A0445046C08及其半衰期延长的版本A044500050。两者均选择性结合MerTK，并在原代巨噬细胞中阻断脂多糖诱导的MerTK切割，而不影响MerTK的配体结合或激酶活性。A044500050在无菌腹膜炎小鼠模型中降低了酵母聚糖诱导的腹膜灌洗液中sMer水平。该研究证明可以产生选择性抑制胞外域脱落的纳米抗体分子，并概述了针对膜蛋白异常切割发挥病理作用的新型药理学方法。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为核心，开发阻断MerTK胞外域脱落的抑制剂。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：基础研究/其他、免疫治疗主要方法：筛选抗MerTK纳米抗体A0445046C08，构建半衰期延长版本，在体外和腹膜炎模型中验证其对MerTK脱落的抑制作用。主要发现：纳米抗体选择性结合MerTK，阻断LPS诱导的胞外域脱落，但不影响配体结合和激酶活性；半衰期延长版本在体内降低sMer水平。潜在优势：传统方法通常靶向配体结合或激酶活性，而该纳米抗体通过稳定受体构象抑制蛋白水解脱落，为膜受体调控提供了新机制。关注理由：该研究展示了纳米抗体在调控膜蛋白脱落中的独特应用，为炎症、自身免疫和肿瘤中MerTK相关疾病提供了新工具。

4. 全文精读分析

研究背景：MerTK是TAM受体酪氨酸激酶家族成员，在凋亡细胞清除和炎症消退中起关键作用。其胞外域脱落导致可溶性Mer（sMer）增加，与多种疾病相关。核心科学问题：能否开发选择性阻断MerTK胞外域脱落的分子，而不干扰其正常配体结合和激酶活性？支架选择逻辑：纳米抗体可识别特定构象表位，可能通过空间位阻或构象稳定抑制蛋白酶对MerTK的切割。筛选与设计路线：筛选抗MerTK纳米抗体；表征结合表位和功能；构建Fc融合半衰期延长版本；体外LPS刺激巨噬细胞和小鼠腹膜炎模型验证。关键实验和证据链：ELISA/SPR测定结合；Western blot检测全长MerTK和sMer；激酶活性实验排除信号干扰；体内sMer水平检测。关键数据：A0445046C08阻断LPS诱导的MerTK脱落；A044500050降低腹膜炎模型中sMer水平。主要结论：纳米抗体可特异性抑制MerTK胞外域脱落，为膜蛋白脱落相关疾病提供新治疗策略。创新点：首次报道选择性抑制受体脱落的纳米抗体，展示了纳米抗体在受体调控中的新机制。局限性：体内长期效应、对其他TAM受体的选择性、疾病模型中的治疗潜力需进一步验证。启发：为开发针对其他膜受体（如EGFR、HER2）脱落调控的纳米抗体提供思路。

5. 一句话评价

该研究开发了选择性阻断MerTK胞外域脱落的纳米抗体，在体外和体内均有效降低可溶性Mer水平，为膜受体调控和炎症相关疾病提供了新工具。

文献 10

英文题目： Biparatopic affibody engineering enables high-affinity sortilin blockade and progranulin elevation.中文题目：双表位affibody工程化实现高亲和力sortilin阻断和前颗粒蛋白水平升高作者：Ek Moira, Lindberg Hanna, Ståhl Stefan, Löfblom John期刊：New biotechnology (N Biotechnol)发表时间：PMID：42457023DOI：10.1016/j.nbt.2026.07.002PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42457023/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：affibody靶点：见摘要应用方向：肿瘤治疗, 诊断/成像, 神经疾病, 工程化/设计, 治疗应用推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

Loss-of-function mutations in the gene encoding progranulin (PGRN) are a common cause of frontotemporal dementia, leading to markedly decreased PGRN levels. A potential therapeutic strategy is therefore to increase extracellular PGRN by blocking sortilin-mediated PGRN clearance. Here, we describe the systematic design and optimization of small biparatopic sortilin-binding proteins based on the non-immunoglobulin affibody scaffold. Two anti-sortilin affibody molecules were genetically fused into a panel of heterodimeric constructs exploring multiple domain orientations, linker lengths, and helix truncations. In total, ten distinct dimer variants were generated and evaluated for binding and functional activity. Optimization of domain arrangement and truncations yielded constructs exhibiting subnanomolar sortilin affinities, corresponding to up to an approximately 45-fold improvement over the strongest monomeric affibody and pronounced avidity effects. In a PGRN clearance assay, the lead 18.6-kDa dimer efficiently increased extracellular PGRN levels with an EC50 value of 0.32 nM and produced substantially greater PGRN fold changes than monomeric constructs. This PGRN elevation was accompanied by marked reductions in both cell surface and total sortilin levels, consistent with effective receptor blockade and modulation. Together, these results demonstrate how systematic combination and geometric optimization of two individually moderate-affinity binders can generate a highly potent biparatopic inhibitor, as well as illustrating the versatility of compact and modular affibody molecules as building blocks in therapeutic protein design. Given the growing amount of evidence implicating sortilin in neurodegeneration, inflammation, and cancer, biparatopic affibody-based inhibitors may enable exploration of this pathway in diverse biological contexts, both as research tools and as starting points for drug development.

2. 摘要中文翻译

编码前颗粒蛋白（PGRN）的基因功能丧失突变是额颞叶痴呆的常见原因，导致PGRN水平显著降低。因此，通过阻断sortilin介导的PGRN清除来增加细胞外PGRN是一种潜在治疗策略。本研究描述了基于非免疫球蛋白affibody支架的小型双表位sortilin结合蛋白的系统设计和优化。将两种抗sortilin affibody分子基因融合成一组异二聚体构建体，探索多种结构域取向、连接子长度和螺旋截短。共产生并评估了10种不同的二聚体变体的结合和功能活性。通过优化结构域排列和截短，获得了亚纳摩尔级sortilin亲和力的构建体，相比最强单体affibody亲和力提高约45倍，并表现出显著的avidity效应。在PGRN清除实验中，领先的18.6 kDa二聚体以0.32 nM的EC50有效增加细胞外PGRN水平，并产生比单体构建体更大的PGRN倍数变化。这种PGRN升高伴随着细胞表面和总sortilin水平的显著降低，与有效受体阻断和调节一致。总之，这些结果展示了如何通过系统组合和几何优化两个单独中等亲和力结合物来产生高 potency 双表位抑制剂，并说明了紧凑且模块化的affibody分子作为治疗蛋白设计构建单元的多功能性。鉴于越来越多证据将sortilin与神经退行性疾病、炎症和癌症联系起来，基于双表位affibody的抑制剂可作为研究工具和药物开发起点，用于探索该通路在多种生物学背景中的作用。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以affibody蛋白支架为核心，开发双表位sortilin抑制剂用于提升PGRN水平治疗额颞叶痴呆。

支架类型：affibody应用场景：神经疾病、肿瘤治疗、治疗应用主要方法：将两种抗sortilin affibody通过不同连接子和取向融合为双表位构建体，系统优化亲和力、PGRN提升活性和sortilin阻断效率。主要发现：优化的双表位affibody达到亚纳摩尔级sortilin亲和力（较单体提高45倍）；领先构建体EC50 0.32 nM提升细胞外PGRN；降低细胞表面和总sortilin水平。潜在优势：affibody分子量小（18.6 kDa）、非免疫球蛋白来源、模块化，双表位设计通过avidity效应大幅提高亲和力，适合中枢神经系统递送。关注理由：该研究展示了affibody在神经退行性疾病靶向治疗中的工程化潜力，为PGRN相关额颞叶痴呆提供了先导分子。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究通过affibody双表位工程化获得亚纳摩尔级sortilin抑制剂，有效提升细胞外PGRN水平，为额颞叶痴呆等神经退行性疾病提供了 compact 治疗候选分子。

文献 11

英文题目： Screening and Preliminary Identification of Inhibin α Subunit-Specific Nanobodies Through High-Throughput Sequencing Combined with Mass Spectrometry.中文题目：通过高通量测序筛选和初步鉴定抑制素α亚基特异性纳米抗体作者：Ma Jifu, Kairat Zhumanov, Lyalla Bupebayeva, Ma Zhongmei, Hazihan Wurelihazi期刊：Animals : an open access journal from MDPI (Animals (Basel))发表时间：PMID：42450668DOI：10.3390/ani16131961PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42450668/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：OA（PMC全文）PMC ID：PMCPMC13360298PMC 全文链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMCPMC13360298/支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：诊断/成像, 筛选平台/方法推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

Inhibin, a water-soluble protein emitted by the gonads, plays a pivotal role in regulating the release of follicle-stimulating hormone (FSH) from the pituitary gland, which, in turn, influences follicular growth, gamete production, and the secretion of associated hormones. We performed high-throughput sequencing of the nanobody gene in the lymphocytes of Bactrian camels before and after inhibin α protein immunization followed by mass spectrometry analysis of specific antibodies to this protein in the serum following immunization to screen for inhibin α subunit-specific nanobodies. Seven inhibin α-specific nanobodies, namely Nb-1712, Nb-1971, Nb-2000, Nb-799, Nb-2004, Nb-1737, and Nb-338, were identified through high-throughput sequencing and mass spectrometry. Following the construction and expression of a prokaryotic expression vector, five of these nanobody proteins were successfully produced. These proteins demonstrated high affinity for inhibin α in the indirect enzyme-linked immunosorbent assay. Notably, nanobodies Nb-1737, Nb-1971, and Nb-2004 significantly downregulated Inha and upregulated Fshb gene expression, enhancing follicle-stimulating hormone secretion. In female mice, these three nanobodies promoted follicular development and led to a numerical increase in litter size (average ~10%, with Nb-2004 showing a 14.93% increase), although the differences were not statistically significant. These findings demonstrate their potential to regulate reproductive function. We identified 7 inhibin α subunit-specific nanobody genes from a Xinjiang Bactrian camel's lymphocyte genome through high-throughput sequencing and mass spectrometry. We also compared their relative binding affinities and characterized their biological functions, thereby providing key theoretical guidance and technical support for increasing FSH levels.

2. 摘要中文翻译

抑制素是性腺分泌的水溶性蛋白，在调节垂体促卵泡激素（FSH）释放中起关键作用，进而影响卵泡生长、配子产生和相关激素分泌。我们对双峰驼免疫前后淋巴细胞中的纳米抗体基因进行高通量测序，并对免疫后血清中针对抑制素α蛋白的特异性抗体进行质谱分析，以筛选抑制素α亚基特异性纳米抗体。通过高通量测序和质谱分析鉴定了7种抑制素α特异性纳米抗体，即Nb-1712、Nb-1971、Nb-2000、Nb-799、Nb-2004、Nb-1737和Nb-338。构建原核表达载体后，成功表达了其中5种纳米抗体蛋白。这些蛋白在间接酶联免疫吸附试验中表现出对抑制素α的高亲和力。值得注意的是，纳米抗体Nb-1737、Nb-1971和Nb-2004显著下调Inha并上调Fshb基因表达，增强促卵泡激素分泌。在雌性小鼠中，这三种纳米抗体促进卵泡发育并导致窝仔数数值增加（平均约10%，Nb-2004增加14.93%），尽管差异无统计学意义。这些发现证明了其调节生殖功能的潜力。我们从新疆双峰驼淋巴细胞基因组中通过高通量测序和质谱分析鉴定了7种抑制素α亚基特异性纳米抗体基因，并比较了它们的相对结合亲和力，表征了它们的生物学功能，从而为增加FSH水平提供了关键理论指导和技术支持。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为核心，开发抑制素α亚基特异性纳米抗体用于调控生殖内分泌。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：诊断/成像、筛选平台/方法主要方法：通过骆驼免疫、高通量测序和质谱筛选抑制素α特异性纳米抗体，表达纯化后评估结合亲和力和对FSH分泌的调控作用。主要发现：鉴定7种抑制素α特异性纳米抗体；5种成功表达；3种可下调Inha、上调Fshb并促进卵泡发育；Nb-2004使窝仔数增加14.93%。潜在优势：纳米抗体可作为抑制素拮抗剂调控FSH分泌，为动物繁殖和生殖医学提供新型生物制剂。关注理由：该研究展示了纳米抗体在农业动物繁殖和生殖内分泌调控中的应用潜力，是该领域较少见的转化研究。

4. 全文精读分析

研究背景：抑制素负反馈抑制FSH分泌，抑制素拮抗剂可提高FSH水平，促进卵泡发育和繁殖效率。传统单克隆抗体成本高、生产周期长。核心科学问题：能否利用纳米抗体特异性结合抑制素α亚基，阻断其对FSH分泌的抑制作用？支架选择逻辑：骆驼科纳米抗体可识别小分子和隐藏表位，易于在原核系统中表达，适合农业应用大规模生产。筛选与设计路线：双峰驼免疫抑制素α；淋巴细胞纳米抗体 repertoire 高通量测序；血清抗体质谱鉴定特异性序列；原核表达和亲和力验证；细胞和小鼠功能实验。关键实验和证据链：ELISA验证结合；细胞培养检测FSH分泌；雌性小鼠卵泡发育和繁殖性能评估。关键数据：7种特异性纳米抗体；Nb-2004使窝仔数增加14.93%（虽未达统计学显著）。主要结论：抑制素α特异性纳米抗体可调控FSH分泌和卵泡发育，具有生殖调控应用潜力。创新点：将高通量测序和质谱结合用于纳米抗体筛选；针对抑制素α开发功能性纳米抗体。局限性：样本量小、统计学显著性不足、机制研究不够深入；临床/农业转化需大量验证。启发：纳米抗体可作为农业动物繁殖调控的新型工具，也可探索用于人类生殖医学。

5. 一句话评价

该研究从双峰驼中筛选到抑制素α特异性纳米抗体，可上调FSH表达并促进卵泡发育，为生殖内分泌调控和动物繁殖提供了新型纳米抗体工具。

文献 12

英文题目： Exploring the CD38-associated surfaceome via nanobody-targeted TurboID.中文题目：通过纳米抗体靶向TurboID探索CD38相关表面蛋白质组作者：Feng Kangze, Wei Ying, Yu Shangcheng, et al.期刊：Molecular & cellular proteomics : MCP (Mol Cell Proteomics)发表时间：PMID：42448231DOI：10.1016/j.mcpro.2026.101623PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42448231/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：肿瘤治疗, 诊断/成像, 治疗应用推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

CD38 is a cell-surface glycoprotein whose molecular functions are closely linked to its surrounding protein environment. To date, omics-level understanding of CD38-associated surface proteins remains lacking. To investigate the CD38-proximal surfaceome in live adherent cell culture, we developed nanobody-targeted TurboID (NBID), a proximity labeling approach using protein-of-interest (POI)-specific nanobody-TurboID chimeras (NTCs), and applied this approach to characterize CD38-proximal proteome on the cell surface. The approach was validated using EGFR-targeting NTC construct, which recovered multiple known EGFR-associated proteins. CD38-specific NTC was applied to A549 lung cancer cells and THP-1 monocytic leukemia cells, and enriched multiple proteins involved in adhesion, ECM organization, and lipid raft-associated membrane domains. In A549 cells, proteins related to Wnt signaling were additionally enriched. NAD+ treatment did not significantly alter the CD38-proximal surfaceome in A549 cells. Total internal reflection fluorescence microscopy further demonstrated co-clustering of several enriched candidates with CD38 on membrane protrusions. Functional assays showed that CD38 contributes to transendothelial migration of A549 cells. By combining NBID with stable isotope labeling by amino acids in cell culture (SILAC), we further identified CD38-associated cadherin adhesion complexes involving CDH2 and DSG2 at the tumor-endothelial interface. Together, these results establish NBID as a robust platform for investigating surface protein environments and intercellular protein neighborhoods under native conditions. Furthermore, our findings reveal a CD38-associated membrane adhesion network and provide new insight into the role of CD38 in tumor cell migration and tumor-endothelial interactions.

2. 摘要中文翻译

CD38是一种细胞表面糖蛋白，其分子功能与周围蛋白环境密切相关。迄今为止，对CD38相关表面蛋白的组学水平理解仍然缺乏。为研究活贴壁细胞培养中CD38近端表面蛋白质组，我们开发了纳米抗体靶向TurboID（NBID），一种使用靶蛋白特异性纳米抗体-TurboID嵌合体（NTCs）的邻近标记方法，并将其应用于表征细胞表面CD38近端蛋白质组。该方法使用EGFR靶向NTC构建体验证，恢复了多个已知EGFR相关蛋白。CD38特异性NTC应用于A549肺癌细胞和THP-1单核白血病细胞，富集了多个参与黏附、细胞外基质（ECM）组织和脂筏相关膜结构域的蛋白。在A549细胞中， additionally 富集了Wnt信号相关蛋白。NAD+处理未显著改变A549细胞中的CD38近端表面蛋白质组。全内反射荧光显微镜进一步证明多个富集候选蛋白与CD38在膜突起上共聚集。功能实验显示CD38促进A549细胞的跨内皮迁移。通过将NBID与细胞培养中氨基酸稳定同位素标记（SILAC）结合，我们进一步鉴定了肿瘤-内皮界面涉及CDH2和DSG2的CD38相关钙黏蛋白黏附复合物。这些结果共同确立了NBID作为研究天然条件下表面蛋白环境和细胞间蛋白邻域的 robust 平台。此外，我们的发现揭示了CD38相关的膜黏附网络，并为CD38在肿瘤细胞迁移和肿瘤-内皮相互作用中的作用提供了新见解。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为核心，开发纳米抗体靶向TurboID（NBID）邻近标记技术，用于解析CD38表面蛋白质组。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：肿瘤治疗、诊断/成像、基础研究主要方法：构建CD38特异性纳米抗体-TurboID嵌合体，通过邻近生物素标记和质谱鉴定CD38近端蛋白，结合SILAC和功能实验验证。主要发现：NBID鉴定了CD38相关的黏附、ECM、脂筏和Wnt信号蛋白；CD38促进肿瘤细胞跨内皮迁移；发现CD38-CDH2-DSG2黏附复合物。潜在优势：纳米抗体介导的邻近标记具有更高靶向特异性和细胞表面适用性，可解析膜蛋白微环境。关注理由：该研究提供了一种新的膜蛋白邻近标记工具NBID，对理解CD38在肿瘤转移和微环境中的作用具有重要意义。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究开发了基于纳米抗体的邻近标记平台NBID，系统解析了CD38表面蛋白质组，揭示了其在肿瘤迁移和肿瘤-内皮相互作用中的新功能。

文献 13

英文题目： CXCR4-EGFR heteromers show ligand-dependent changes in conformation and signaling.中文题目：CXCR4-EGFR异源二聚体显示配体依赖的构象和信号变化作者：Comez Dehan, Anbuhl Stephanie M, Platt Simon, et al.期刊：Cell chemical biology (Cell Chem Biol)发表时间：PMID：42447861DOI：10.1016/j.chembiol.2026.06.008PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42447861/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：肿瘤治疗, 诊断/成像推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

The chemokine CXCR4 receptor and epidermal growth factor receptor (EGFR) are cell surface receptors that are overexpressed in numerous types of cancer. In this study, we have investigated the formation of CXCR4-EGFR heteromers using bioluminescence resonance energy transfer (BRET) and nanobody-based proximity ligation assays (PLAs). The present study demonstrated that EGFR and CXCR4 can form oligomeric complexes that were capable of coupling to PLCγ, Gi proteins and β-arrestin-2. The presence of these oligomeric complexes was detected by PLA in native HeLa cells at endogenous levels of expression using receptor-selective nanobody-oligonucleotide conjugates. Furthermore, the individual receptor components of the oligomer underwent conformation changes in response to EGF and CXCL12, which in the case of Gi-signalling led to altered responses to combinations of CXCL12 and EGF. This may have clinical implications in those cancers where both EGFR and CXCR4 are overexpressed.

2. 摘要中文翻译

趋化因子CXCR4受体和表皮生长因子受体（EGFR）是在多种癌症中过表达的细胞表面受体。本研究使用生物发光共振能量转移（BRET）和基于纳米抗体的邻近连接测定（PLA）研究了CXCR4-EGFR异源二聚体的形成。本研究证明EGFR和CXCR4可形成能够与PLCγ、Gi蛋白和β-arrestin-2偶联的寡聚复合物。使用受体选择性纳米抗体-寡核苷酸偶联物，在天然HeLa细胞内源性表达水平下通过PLA检测到这些寡聚复合物的存在。此外，寡聚复合物的单个受体组分响应EGF和CXCL12发生构象变化，在Gi信号传导情况下导致对CXCL12和EGF组合的反应改变。这在EGFR和CXFR均过表达的癌症中可能具有临床意义。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为检测工具，研究CXCR4-EGFR异源二聚体的形成和配体依赖性信号调控。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：肿瘤治疗、诊断/成像、结构解析主要方法：利用受体选择性纳米抗体-寡核苷酸偶联物进行PLA，结合BRET技术研究CXCR4-EGFR异源二聚体及其信号偶联。主要发现：CXCR4和EGFR可形成功能性寡聚复合物，偶联PLCγ、Gi和β-arrestin-2；配体诱导受体构象变化并改变Gi信号响应。潜在优势：纳米抗体-寡核苷酸偶联物PLA可在内源性表达水平检测受体相互作用，避免过表达系统的假阳性。关注理由：该研究利用纳米抗体工具揭示了GPCR-RTK异源二聚体的信号调控机制，对理解肿瘤中受体交叉对话和设计联合靶向策略具有价值。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究利用纳米抗体-寡核苷酸PLA和BRET技术，在天然表达水平证实CXCR4-EGFR形成功能性异源寡聚体，并揭示其配体依赖的信号调控机制。

文献 14

英文题目： SpyCatcher-Engineered Ferritin Nanocages Enable Dual-Receptor Targeting for Enhanced Glioma Therapy.中文题目：SpyCatcher工程化铁蛋白纳米笼实现双受体靶向以增强胶质瘤治疗作者：Chen Yuan, Lou Zhao, Chu Yuteng, et al.期刊：Bioconjugate chemistry (Bioconjug Chem)发表时间：PMID：42383853DOI：10.1021/acs.bioconjchem.6c00228PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42383853/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：affibody靶点：见摘要应用方向：肿瘤治疗, 药物递送, 神经疾病, 工程化/设计, 治疗应用推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

Human heavy-chain ferritin (FTn) that can bind to transferrin receptor 1 (TfR1) has emerged as a promising platform for brain tumor drug delivery. However, the broad expression of TfR1 in normal tissues fundamentally limits tumor selectivity and therapeutic precision. Herein, we engineered a dual-receptor-targeting FTn nanoplatform by site-specifically conjugating an epidermal growth factor receptor (EGFR) affibody to FTn using the SpyCatcher/SpyTag system, generating FTn-EGFRAfb nanoparticles. This modular strategy preserves FTn architecture and stability while enabling precise ligand conjugation. Doxorubicin (DOX) was efficiently encapsulated via temperature-controlled loading to obtain DOX@FTn-EGFRAfb with high protein recovery, pH-responsive drug release, and strong stability. In vitro, the nanoparticles showed enhanced uptake and cytotoxicity in TfR1/EGFR double-positive U87 glioma cells. In an orthotopic U87 glioma mouse model, DOX@FTn-EGFRAfb significantly inhibited tumor growth and prolonged survival without obvious systemic toxicity. This work presents a versatile protein-engineering strategy for dual-targeted glioblastoma drug delivery.

2. 摘要中文翻译

可结合转铁蛋白受体1（TfR1）的人重链铁蛋白（FTn）已成为脑肿瘤药物递送的有前景平台。然而，TfR1在正常组织中的广泛表达从根本上限制了肿瘤选择性和治疗精准性。本研究通过使用SpyCatcher/SpyTag系统将表皮生长因子受体（EGFR）affibody位点特异性偶联至FTn，工程化了一种双受体靶向FTn纳米平台，即FTn-EGFRAfb纳米颗粒。这种模块化策略保持了FTn的架构和稳定性，同时实现了精确的配体偶联。通过温度控制加载高效封装阿霉素（DOX），获得高蛋白回收率、pH响应性药物释放和强稳定性的DOX@FTn-EGFRAfb。在体外，纳米颗粒在TfR1/EGFR双阳性U87胶质瘤细胞中显示出增强的摄取和细胞毒性。在原位U87胶质瘤小鼠模型中，DOX@FTn-EGFRAfb显著抑制肿瘤生长并延长生存期，且无显著全身毒性。这项工作提出了一种用于双靶向胶质母细胞瘤药物递送的多功能蛋白工程策略。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以affibody蛋白支架为核心，工程化双受体靶向铁蛋白纳米笼用于胶质瘤药物递送。

支架类型：affibody应用场景：肿瘤治疗、药物递送、神经疾病主要方法：通过SpyCatcher/SpyTag将EGFR affibody偶联至FTn，构建FTn-EGFRAfb纳米笼，封装DOX，在胶质瘤细胞和原位模型中评估靶向递送和疗效。主要发现：双靶向纳米笼保持FTn结构稳定性；在U87细胞中增强摄取和细胞毒性；原位模型显著抑制肿瘤生长并延长生存；无明显全身毒性。潜在优势：affibody作为靶向模块具有小尺寸、高稳定性、易于位点特异性偶联；双受体靶向提高肿瘤选择性，克服单受体在正常组织广泛表达的限制。关注理由：该研究展示了affibody在蛋白纳米笼工程化和脑肿瘤靶向递送中的优秀性能，为胶质母细胞瘤治疗提供了新策略。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究利用SpyCatcher/SpyTag将EGFR affibody偶联至铁蛋白纳米笼，实现TfR1/EGFR双受体靶向胶质瘤药物递送，在原位模型中显著抑制肿瘤生长并延长生存。

文献 15

英文题目： Self-Healing Dye-Conjugated Nanobody Probe for Super-Resolution Imaging with Enhanced Photon Budget.中文题目：自修复染料偶联纳米抗体探针用于具有增强光子预算的超分辨成像作者：Shen Dongwen, Yang Jiazhen, Wang Ting, Chen Yu, Zhang Lei期刊：The journal of physical chemistry letters (J Phys Chem Lett)发表时间：PMID：42371833DOI：10.1021/acs.jpclett.6c01277PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42371833/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：诊断/成像推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

Super-resolution microscopy imaging requires target-specific probes that deliver a high photon budget while minimizing perturbation to the protein of interest. Here, we report a nanobody probe generated by site-specific conjugation of a photostabilizer-fluorophore construct to an anti-GFP single-domain nanobody. This conjugate enhances the photon budget of the fluorophore by suppressing triplet-state populations via intramolecular triplet energy transfer, while simultaneously preserving nanomolar affinity for targeting GFP-tagged proteins. Compared to unmodified counterparts, the self-healing dye-conjugated nanobody exhibits a 38-83% excitation-power-dependent increase in solution molecular brightness and markedly enhanced single-molecule photophysics, yielding 6-fold and 42-fold increases in cumulative photon output under ambient and oxygen-scavenging conditions, respectively. When applied to GFP-tagged Nup96 protein in mammalian cells, the self-healing dye-conjugated nanobody proves significant advantage in single-molecule localization microscopy, where the improved photon budget and photoswitching kinetics directly improve localization precision. These results establish the self-healing dye-conjugated nanobody as a robust, ready-to-use probe for high-performance single-molecule localization-based super-resolution imaging.

2. 摘要中文翻译

超分辨显微镜成像需要靶点特异性探针，在最小化对目标蛋白扰动的同时提供高光子预算。本研究报道了一种通过将光稳定剂-荧光团构建体位点特异性偶联至抗GFP单域纳米抗体而产生的纳米抗体探针。该偶联物通过分子内三重态能量转移抑制三重态布居，同时保持对GFP标记蛋白的纳摩尔级亲和力，从而增强荧光团的光子预算。与未修饰对应物相比，自修复染料偶联纳米抗体在溶液分子亮度上表现出38-83%的激发功率依赖性增加，单分子光物理性质显著增强，在常温和除氧条件下累积光子输出分别增加6倍和42倍。应用于哺乳动物细胞中GFP标记的Nup96蛋白时，自修复染料偶联纳米抗体在单分子定位显微镜中证明显著优势，改善的光子预算和光开关动力学直接提高了定位精度。这些结果确立了自修复染料偶联纳米抗体作为高性能单分子定位超分辨成像的稳健即用型探针。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为核心，开发自修复染料偶联纳米抗体探针用于超分辨成像。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：诊断/成像主要方法：将光稳定剂-荧光团位点特异性偶联至抗GFP纳米抗体，评估光子预算、单分子性质和超分辨成像性能。主要发现：自修复染料纳米抗体溶液亮度增加38-83%；累积光子输出在常温和除氧条件下分别提高6倍和42倍；应用于Nup96超分辨成像显著提高定位精度。潜在优势：纳米抗体小尺寸可减少对目标蛋白的空间位阻和细胞功能扰动；自修复染料提高光稳定性，延长成像时间和精度。关注理由：该研究为活细胞超分辨成像提供了高性能纳米抗体探针，对细胞生物学和结构研究具有工具价值。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究开发的自修复染料偶联抗GFP纳米抗体探针显著提升了单分子定位超分辨成像的光子预算和定位精度，为活细胞高分辨率成像提供了新工具。

文献 16

英文题目： One-Pot Orthogonal Dual Functionalization of mi3 Self-Assembling Protein Nanoparticles via Sortase A and SpyCatcher/SpyTag Ligation.中文题目：通过Sortase A一锅法正交双功能化mi3自组装蛋白纳米颗粒作者：Wei Liqiang, Wang Hongfei, Du Chunyue, Kam Antony, Loo Shining期刊：Bioconjugate chemistry (Bioconjug Chem)发表时间：PMID：42350270DOI：10.1021/acs.bioconjchem.6c00173PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42350270/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：OA（PMC全文）PMC ID：PMCPMC13377597PMC 全文链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMCPMC13377597/支架类型：affibody靶点：见摘要应用方向：肿瘤治疗, 诊断/成像, 药物递送, 工程化/设计, 治疗应用推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

We present a one-pot approach for orthogonal dual functionalization of mi3 self-assembling protein nanoparticles by combining SpyCatcher003/SpyTag003 isopeptide bond formation with Sortase A-mediated transpeptidation. The nanoparticles were engineered with N-terminal SpyCatcher003 domains and C-terminal LPETGGH motifs, enabling site-specific conjugation of distinct cargo molecules. To overcome expression limitations, an N-terminal vesicle nucleating peptide (VNP6) was incorporated, which enhanced protein yields while maintaining nanocage integrity. Critical to this strategy, the calcium-independent Sortase A variant (SRT7+) was employed to avoid calcium-induced nanoparticle aggregation, enabling orthogonal ligation under physiological conditions. The platform enabled simultaneous conjugation of HER2-targeting affibodies and fluorescent probes in a single reaction, and these dual-functionalized self-assembling protein nanoparticles exhibited specific cellular uptake in HER2-positive cancer cells. This integrated one-pot approach proved scalable and modular for engineering protein-based nanomaterials for targeted therapy and diagnostics.

2. 摘要中文翻译

我们提出了一种通过结合SpyCatcher003/SpyTag003异肽键形成与Sortase A介导转肽反应，对mi3自组装蛋白纳米颗粒进行正交双功能化的一锅法策略。纳米颗粒被工程化带有N端SpyCatcher003结构域和C端LPETGGH基序，能够位点特异性偶联不同货物分子。为克服表达限制，引入了N端囊泡成核肽（VNP6），在保持纳米笼完整性的同时提高蛋白产量。该策略的关键在于使用不依赖钙的Sortase A变体（SRT7+），避免钙诱导的纳米颗粒聚集，实现在生理条件下的正交连接。该平台能够在单一反应中同时偶联HER2靶向affibody和荧光探针，这些双功能化自组装蛋白纳米颗粒在HER2阳性癌细胞中表现出特异性细胞摄取。这种整合的一锅法方法被证明可扩展且模块化，适用于工程化蛋白基纳米材料用于靶向治疗和诊断。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以affibody蛋白支架为核心，开发一锅法双功能化自组装蛋白纳米颗粒平台。

支架类型：affibody应用场景：肿瘤治疗、诊断/成像、药物递送主要方法：将SpyCatcher003/SpyTag003异肽键形成与Sortase A转肽结合，实现mi3纳米颗粒的N端和C端正交双功能化；偶联HER2靶向affibody和荧光探针。主要发现：VNP6提高表达产量；SRT7+避免钙诱导聚集；一锅法成功实现affibody和荧光探针同时偶联；双功能纳米颗粒在HER2阳性细胞中特异性摄取。潜在优势：正交双功能化平台模块化、可扩展，可同时整合靶向配体和治疗/诊断载荷，简化生产流程。关注理由：该研究提供了一种通用的蛋白纳米颗粒双功能化策略，affibody作为靶向模块展示了良好的模块化和细胞靶向性。

4. 全文精读分析

研究背景：自组装蛋白纳米颗粒（如mi3）是多价递送和诊断平台，但需要高效、位点特异性的双功能化方法同时装载靶向配体和货物。核心科学问题：如何在不破坏纳米笼结构的前提下，实现蛋白纳米颗粒的一锅法正交双功能化？支架选择逻辑：HER2 affibody作为靶向模块，小尺寸、高亲和力、可基因编码，适合通过Sortase A或SpyTag/SpyCatcher偶联至纳米颗粒表面。筛选与设计路线：设计mi3-SpyCatcher003-LPETGGH载体；引入VNP6提高表达；筛选钙非依赖Sortase A变体SRT7+；一锅法偶联affibody和荧光探针；细胞摄取验证。关键实验和证据链：SDS-PAGE/SEC验证偶联效率和纳米笼完整性；DLS/TEM表征；流式/共聚焦检测HER2阳性细胞摄取。关键数据：一锅法正交双功能化成功；HER2阳性细胞特异性摄取。主要结论：整合SpyTag/SpyCatcher和Sortase A的一锅法平台可实现蛋白纳米颗粒的高效双功能化。创新点：一锅法正交双功能化避免多步纯化；使用钙非依赖Sortase A解决聚集问题。局限性：体内分布、药代动力学、载荷容量和治疗疗效未充分评估。启发：该平台可扩展至其他靶向配体和治疗分子，用于构建模块化纳米诊疗系统。

5. 一句话评价

该研究通过整合SpyTag/SpyCatcher和Sortase A技术，实现了mi3蛋白纳米颗粒的一锅法正交双功能化，并成功偶联HER2 affibody用于靶向细胞摄取。

文献 17

英文题目： Rapid Affinity Characterization of Cell-Free Expressed Nanobodies Directly in Lysate with Biolayer Interferometry via Antigen-Immobilized Biosensors.中文题目：利用生物层干涉仪直接无细胞表达纳米抗体的快速亲和力表征作者：Lange Bret, Godin Ryan, Schnicker Nicholas J, Wadas Thaddeus J, Reuel Nigel F期刊：ACS synthetic biology (ACS Synth Biol)发表时间：PMID：42301098DOI：10.1021/acssynbio.6c00062PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42301098/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：诊断/成像, 筛选平台/方法, 工程化/设计推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

There have been a few recent works showing the advantages of combining cell-free protein expression (CFE) with biolayer interferometry (BLI) for the rapid kinetic characterization of novel capture proteins, such as nanobodies, to build out sequence-to-function data sets. Such data can inform iterative, machine-learning-guided models to optimize binding to a target antigen. In this work, we extend these approaches by presenting a new CFE-BLI workflow that flips the BLI binding orientation so that the target protein is immobilized on the biosensor surface and the CFE-expressed nanobody is measured directly in the lysate. This expands the applicability of CFE-BLI screening to encompass a larger set of nanobody-antigen pairs, such as multimeric target proteins. Our workflow utilizes a fluorogenic HaloTag fusion protein that enables precise protein quantification while also amplifying the BLI signal of smaller-molecular-weight binders like nanobodies. We test our workflow here using two previously characterized nanobodies (I3 and 2Rs15d) and show that our CFE-BLI screening method can calculate equilibrium dissociation constants (KD) similar to those previously reported. We further combine our workflow with a modern combinatorial mutagenesis workflow to screen 12 previously uncharacterized I3 nanobody mutants for improved affinity, demonstrating its potential use in rapid, high-iteration active-learning-guided protein engineering campaigns, especially on multimeric targets that may be presented in complex backgrounds.

2. 摘要中文翻译

近期有少数研究展示了将无细胞蛋白表达（CFE）与生物层干涉仪（BLI）相结合用于快速动力学表征新型捕获蛋白（如纳米抗体）的优势，以构建序列-功能数据集。此类数据可为迭代、机器学习指导的模型提供信息，以优化与靶抗原的结合。本研究通过提出一种新的CFE-BLI工作流程扩展了这些方法，该流程翻转了BLI结合方向，使靶蛋白固定在生物传感器表面，直接在裂解液中测量CFE表达的纳米抗体。这扩大了CFE-BLI筛选的适用范围，使其涵盖更大的纳米抗体-抗原对集合，如多聚体靶蛋白。我们的工作流程利用荧光HaloTag融合蛋白实现精确蛋白定量，同时放大较小分子量结合物（如纳米抗体）的BLI信号。我们使用两种先前表征的纳米抗体（I3和2Rs15d）测试了该工作流程，并证明我们的CFE-BLI筛选方法可计算与先前报道相似的平衡解离常数（KD）。我们进一步将该工作流程与现代组合突变工作流程相结合，筛选12种先前未表征的I3纳米抗体突变体以提高亲和力，展示了其在快速、高迭代主动学习指导蛋白工程活动中的潜在用途，特别是在可能以复杂背景呈现的多聚体靶标上。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为核心，开发无细胞表达结合BLI的快速亲和力筛选平台。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：诊断/成像、筛选平台/方法、工程化/设计主要方法：将靶蛋白固定于BLI生物传感器，直接测量CFE裂解液中的纳米抗体；使用HaloTag荧光融合蛋白定量并放大信号；验证已知纳米抗体并筛选I3突变体。主要发现：CFE-BLI可快速获得与文献报道一致的KD值；适用于多聚体靶蛋白；可集成到主动学习蛋白工程流程中。潜在优势：无需纯化即可直接表征纳米抗体亲和力，大幅提高筛选通量，降低蛋白制备成本。关注理由：该研究为纳米抗体高通量亲和力成熟和机器学习指导优化提供了实用工具。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究开发了无细胞表达结合BLI的快速纳米抗体亲和力表征平台，无需纯化即可在裂解液中直接测定KD，为高通量纳米抗体工程提供了高效工具。

文献 18

英文题目： Chelator-Free Radiometal Labeling Inside Engineered Affibodies.中文题目：工程化affibody内部的无螯合剂放射性金属标记作者：Davies Lani J, Somathilake Upamali, Kumaresan Santhanalaxmi, et al.期刊：Angewandte Chemie (International ed. in English) (Angew Chem Int Ed Engl)发表时间：PMID：42237896DOI：10.1002/anie.6657079PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42237896/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：OA（PMC全文）PMC ID：PMCPMC13382918PMC 全文链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMCPMC13382918/支架类型：affibody靶点：见摘要应用方向：肿瘤治疗, 诊断/成像, 工程化/设计, 治疗应用推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

Affibodies are remarkably stable three-helix bundle proteins that can be engineered to selectively bind target proteins. When combined with radioactive metals, they serve as imaging agents or cancer therapeutics, depending on the metal used. Traditionally, this involves bifunctional linkers that attach large chelators to the affibody via reactive groups. Here, we present an alternative approach that eliminates the need for such linkers by burying the metal within the core of the affibody, surrounded by its three helices. A simple engineered triple cysteine motif, with one cysteine in each helix, stably binds Bi(III), Pb(II), In(III), and Ga(III), which are commonly used in imaging and radiotherapy. Quantitative metal uptake is instantaneous at room temperature and physiological pH, and all metal-affibody complexes remain fully intact for one week at 4 °C. All retain their metal cargo when challenged with cellular concentrations of glutathione, while only the bismuth-affibody complex withstands a challenge with 100 equivalents of strong chelators, even over two weeks. We demonstrate that, a bismuth‑loaded affibody retains binding affinity to the HER2 receptor comparable to the wildtype affibody, while selectively binding and retaining 213Bi, a promising radioisotope for targeted alpha therapy, thereby enabling targeting of HER2‑overexpressing SKBR3 cancer cells.

2. 摘要中文翻译

Affibody是高度稳定的三螺旋束蛋白，可工程化选择性结合靶蛋白。与放射性金属结合后，根据所用金属可作为成像剂或癌症治疗药物。传统上，这需要通过反应基团将大螯合剂连接到affibody的双功能连接子。本研究提出了一种替代方法，通过将金属埋藏在affibody核心内，周围环绕其三螺旋，从而无需此类连接子。一种简单的工程化三半胱氨酸基序（每螺旋一个半胱氨酸）可稳定结合Bi(III)、Pb(II)、In(III)和Ga(III)，这些是成像和放疗中常用的金属。定量金属摄取在室温和生理pH下瞬间完成，所有金属-affibody复合物在4°C下保持完整一周。当受到细胞浓度谷胱甘肽挑战时，所有复合物均保留其金属 cargo，只有铋-affibody复合物即使在100当量强螯合剂挑战下也能在两周内保持不变。我们证明，铋负载affibody保留了与野生型affibody相当的HER2受体结合亲和力，同时选择性地结合并保留213Bi，这是一种有前景的靶向α治疗放射性同位素，从而能够靶向HER2过表达的SKBR3癌细胞。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以affibody蛋白支架为核心，开发无螯合剂放射性金属标记方法用于靶向成像和治疗。

支架类型：affibody应用场景：肿瘤治疗、诊断/成像、工程化/设计、放射性配体治疗主要方法：在affibody三螺旋核心中引入三半胱氨酸基序，直接螯合Bi/Pb/In/Ga等放射性金属；验证金属稳定性、HER2结合亲和力和SKBR3细胞靶向性。主要发现：三半胱氨酸affibody可稳定结合多种诊断/治疗用金属；Bi-affibody复合物稳定性最高；213Bi标记affibody保留HER2结合和细胞靶向能力。潜在优势：无需传统双功能螯合剂和连接子，简化放射性药物制备，可能提高肿瘤穿透性和药代动力学。关注理由：该研究为affibody放射性药物开发提供了创新的无螯合剂标记策略，具有临床转化潜力。

4. 全文精读分析

研究背景：放射性标记affibody通常需要双功能螯合剂（如DOTA、NOTA），这些大分子修饰可能影响结合亲和力和体内分布。核心科学问题：能否利用affibody内部结构直接螯合放射性金属，避免外源螯合剂？支架选择逻辑：affibody三螺旋结构稳定，可在核心位置工程化金属结合位点而不显著破坏其折叠和靶点结合。筛选与设计路线：在三螺旋中每螺旋引入一个半胱氨酸形成三半胱氨酸金属结合位点；筛选可稳定结合的金属；评估热力学稳定性、抗谷胱甘肽和螯合剂挑战能力；HER2靶向验证。关键实验和证据链：ICP-MS/放射性标记定量金属结合；稳定性挑战实验；SPR/细胞结合验证HER2亲和力；213Bi细胞靶向实验。关键数据：Bi/Pb/In/Ga定量摄取；Bi复合物抗100当量强螯合剂；HER2结合亲和力与野生型相当。主要结论：无螯合剂affibody可稳定螯合放射性金属，为靶向成像和α治疗提供新策略。创新点：首次将放射性金属直接嵌入affibody核心，实现无螯合剂标记。局限性：体内稳定性、药代动力学、正常器官分布和毒性需进一步评估；金属结合位点是否影响免疫原性未知。启发：该策略可扩展至其他小型稳定蛋白支架，推动紧凑型放射性配体发展。

5. 一句话评价

该研究开发了affibody内部三半胱氨酸金属结合位点，实现了无螯合剂的稳定放射性金属标记，为HER2靶向α治疗提供了新型紧凑放射性药物策略。

文献 19

英文题目： A Novel Nanobody-Based TCR-like CAR T Therapy Targeting PRAME for the Treatment of Acute Myeloid Leukemia.中文题目：靶向PRAME的新型纳米抗体TCR样CAR-T疗法治疗急性髓系白血病作者：Liu Xintong, Li Jianfeng, Li Xue, et al.期刊：Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research (Clin Cancer Res)发表时间：PMID：41985065DOI：10.1158/1078-0432.CCR-25-2726PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/41985065/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：肿瘤治疗, CAR/细胞治疗, 免疫治疗, 细胞内靶向, 筛选平台/方法, 工程化/设计, 治疗应用推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

PURPOSE: Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell immunotherapy in acute myeloid leukemia (AML) remains challenging because of the lack of specific cell surface antigens that are highly expressed on leukemic blasts but largely absent in hematopoietic stem/progenitor cells (HSPC) and healthy tissues. Targeting intracellular antigen via T-cell receptor (TCR)-like CAR T cells offers a promising alternative. This study aimed to develop nanobodies targeting the intracellular antigen preferentially expressed antigen in melanoma (PRAME) and develop a novel nanobody-based TCR-like CAR T-cell therapy. EXPERIMENTAL DESIGN: We investigated the PRAME expression level by analyzing the RNA sequencing data from 1,007 patients with AML and healthy donor samples. We explored the relationships between PRAME expression and the prognosis of AML. Novel nanobodies targeting PRAME425-433/human leukocyte antigen A2 (HLA-A2) were generated via alpaca immunization and yeast surface display and then used to construct TCR-like CAR T cells. The antileukemia potency of the PRAME-targeted TCR-like CAR T cells and their on-target/off-tumor toxicity against normal HSPCs were evaluated. RESULTS: PRAME was highly expressed in AML cells but largely absent in normal hematopoietic cells and healthy tissues and was correlated with poor clinical outcomes in AML. The CAR T cells based on the nanobody targeting PRAME425-433/HLA-A2 exhibited specific and potent antileukemic cytotoxicity against PRAME+HLA-A2+ AML cells in vitro and in vivo, whereas they showed negligible effects on the viability and function of normal HSPCs. CONCLUSIONS: This study demonstrates that PRAME is a promising target for the immunotherapy of AML, and nanobody-based TCR-like CAR T cells targeting PRAME425-433/HLA-A2 exhibit potent antileukemic activity with a favorable off-target safety profile.

2. 摘要中文翻译

目的： 急性髓系白血病（AML）中的嵌合抗原受体（CAR）T细胞免疫治疗仍然具有挑战性，因为缺乏在白血病母细胞上高表达但在造血干/祖细胞（HSPC）和健康组织中 largely 缺失的特异性细胞表面抗原。通过T细胞受体（TCR）样CAR T细胞靶向细胞内抗原提供了一种有前景的替代方案。本研究旨在开发靶向细胞内抗原 preferentially expressed antigen in melanoma（PRAME）的纳米抗体，并开发新型纳米抗体TCR样CAR T细胞疗法。实验设计：通过分析1007例AML患者和健康供体样本的RNA测序数据研究PRAME表达水平。探讨PRAME表达与AML预后的关系。通过羊驼免疫和酵母表面展示产生靶向PRAME425-433/人白细胞抗原A2（HLA-A2）的新型纳米抗体，并用于构建TCR样CAR T细胞。在体外和体内评估PRAME靶向TCR样CAR T细胞的抗白血病效力及其对正常HSPC的on-target/off-tumor毒性。结果：PRAME在AML细胞中高表达，但在正常造血细胞和健康组织中 largely 缺失，且与AML不良临床结局相关。基于靶向PRAME425-433/HLA-A2纳米抗体的CAR T细胞在体外和体内对PRAME+HLA-A2+ AML细胞表现出特异且强效的抗白血病细胞毒性，而对正常HSPC的活性和功能影响可忽略不计。结论：本研究证明PRAME是AML免疫治疗的有前景靶点，靶向PRAME425-433/HLA-A2的纳米抗体TCR样CAR T细胞表现出强效的抗白血病活性和良好的脱靶安全性。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为核心，开发靶向PRAME细胞内抗原的TCR样CAR-T细胞治疗AML。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：肿瘤治疗、CAR/细胞治疗、免疫治疗主要方法：生物信息学分析PRAME在AML中的表达；羊驼免疫和酵母展示筛选靶向PRAME/HLA-A2复合物的纳米抗体；构建TCR样CAR-T并评估抗肿瘤活性和安全性。主要发现：PRAME在AML中高表达且预后不良；纳米抗体TCR样CAR-T对PRAME+HLA-A2+ AML细胞具有强效细胞毒性；对正常HSPC影响小。潜在优势：纳米抗体可识别pMHC复合物，使CAR-T能够靶向细胞内肿瘤抗原，突破表面抗原限制。关注理由：该研究为AML等缺乏合适表面抗原的恶性肿瘤提供了TCR样CAR-T新策略，具有重要的临床转化潜力。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究开发了靶向PRAME/HLA-A2 pMHC复合物的纳米抗体TCR样CAR-T，在AML模型中展现出强效抗白血病活性和良好安全性，为细胞内抗原靶向CAR-T治疗提供了新思路。

文献 20

英文题目： A Simple and Cost-Effective Electrochemical Assay for Heart Failure Prognosis Using Soluble Suppression of Tumorigenicity 2‑Specific Nanobodies.中文题目：使用可溶性肿瘤抑制因子2的简单低成本电化学检测法用于心力衰竭预后作者：Sirimanakul Suwitchaya, Hurley Joseph D, Vutipow Nakarin, et al.期刊：ACS pharmacology & translational science (ACS Pharmacol Transl Sci)发表时间：PMID：42453336DOI：10.1021/acsptsci.6c00082PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42453336/期刊分区：Q2分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：OA（PMC全文）PMC ID：PMCPMC13366334PMC 全文链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMCPMC13366334/支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：肿瘤治疗, 诊断/成像, 筛选平台/方法, 治疗应用推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

Heart failure (HF) is a major global health concern, particularly in low- and middle-income countries where it is often underdiagnosed. Prognostic testing plays a crucial role in guiding treatment and monitoring disease progression. In this study, we developed an electrochemical assay-based prognostic kit for HF detection targeting soluble suppression of tumorigenicity 2 (sST2). This biomarker offers superior prognostic value compared to traditional methods as it remains stable regardless of patient demographics, including age, sex, obesity, and renal status. To reduce production costs and complexity of the test kit, single-domain antibody fragments (nanobodies) were used in place of conventional antibodies, and an electrochemical platform was used instead of ELISA. We obtained 19 candidate nanobodies from screening a naïve, fully synthetic yeast-display nanobody (Nb) library, and four of these (Nb1, Nb2, Nb5, and Nb13) were prioritized for further study on the basis of high affinity and low polyreactivity. Of these, Nb2 and Nb5 enabled sensitive electrochemical detection of sST2 with limits of detection of 3.37 and 3.00 ng/mL, respectively, in PBS buffer. Further validation using patient serum samples with the Nb5-based platform achieved quantitative detection of sST2 across a predilution concentration range from 0.75 to 93.09 ng/mL, facilitated by sample dilution to mitigate matrix effects and surface saturation. Both nanobodies exhibited high target specificity, with no observed cross-reactivity to other HF biomarkers or serum components. This novel prognostic tool can be produced and performed at low cost, providing a new option for heart failure diagnosis and treatment planning, particularly in low- and middle-income countries, where cost is a major cause of underdiagnosis.

2. 摘要中文翻译

心力衰竭（HF）是全球重大健康问题，尤其是在中低收入国家，常被漏诊。预后检测在指导治疗和监测疾病进展中起关键作用。本研究开发了一种基于电化学检测的HF预后试剂盒，靶向可溶性肿瘤抑制因子2（sST2）。与传统方法相比，该生物标志物具有更优越的预后价值，因为它不受患者年龄、性别、肥胖和肾功能等人口统计学特征影响。为降低试剂盒生产成本和复杂性，用单域抗体片段（纳米抗体）替代传统抗体，并用电化学平台替代ELISA。我们从筛选的 naive、全合成酵母展示纳米抗体（Nb）文库中获得19个候选纳米抗体，并根据高亲和力和低多反应性优先选择其中4个（Nb1、Nb2、Nb5和Nb13）进行进一步研究。其中Nb2和Nb5在PBS缓冲液中实现了sST2的灵敏电化学检测，检测限分别为3.37和3.00 ng/mL。使用Nb5平台进一步验证患者血清样本，通过样品稀释缓解基质效应和表面饱和，在0.75至93.09 ng/mL的预稀释浓度范围内实现sST2定量检测。两种纳米抗体均表现出高靶点特异性，未观察到与其他HF生物标志物或血清组分的交叉反应。这种新型预后工具可低成本生产和操作，为心力衰竭诊断和治疗规划提供了新选择，特别是在中低收入国家，成本是诊断不足的主要原因。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为核心，开发用于心力衰竭预后sST2检测的电化学免疫传感器。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：诊断/成像、筛选平台/方法主要方法：从酵母展示纳米抗体文库筛选抗sST2纳米抗体，用电化学平台替代传统ELISA，评估检测性能、特异性和临床血清样本适用性。主要发现：19个候选纳米抗体中4个 prioritization；Nb5检测限3.00 ng/mL；患者血清中可定量检测sST2；高特异性无交叉反应。潜在优势：纳米抗体成本低、稳定性高；电化学检测简便、适合资源有限地区，有助于HF早期诊断和风险分层。关注理由：该研究展示了纳米抗体在低成本POC诊断中的应用潜力，对全球健康具有重要意义。

4. 全文精读分析

研究背景：sST2是HF预后生物标志物，但传统ELISA成本高、操作复杂，限制了中低收入国家的应用。纳米抗体和电化学传感可降低成本并提高可及性。核心科学问题：能否开发基于纳米抗体的低成本电化学sST2检测平台，满足REASSURED诊断标准？支架选择逻辑：纳米抗体可在酵母展示库中高通量筛选，生产成本低、稳定性好，适合POC设备和电化学传感器表面固定。筛选与设计路线：构建naive酵母展示纳米抗体文库；磁珠/流式筛选sST2结合克隆；评估亲和力、多反应性和特异性；构建电化学传感器并验证临床血清。关键实验和证据链：酵母展示筛选；ELISA/SPR亲和力排序；电化学检测性能（LOD、线性范围）；临床血清样本验证；交叉反应性测试。关键数据：Nb5 LOD 3.00 ng/mL；血清样本定量范围0.75-93.09 ng/mL；无交叉反应。主要结论：纳米抗体电化学sST2检测平台具有低成本、高灵敏度和高特异性，适合资源有限地区HF预后。创新点：将全合成酵母展示纳米抗体库与电化学传感结合，开发低成本HF预后工具。局限性：大规模临床验证、长期稳定性和与标准方法的对比研究需进一步开展。启发：该平台模式可推广至其他生物标志物的POC检测，如感染性疾病和肿瘤标志物。

5. 一句话评价

该研究利用酵母展示纳米抗体和电化学传感开发了低成本sST2检测平台，在心力衰竭预后诊断中具有POC应用潜力，尤其适合资源有限地区。

文献 21

英文题目： DNA Origami-Based Multivalent Nanobody Display Platform for Potent Neutralization of Botulinum Neurotoxin Type A.中文题目：基于DNA折纸的多价纳米抗体展示平台强效中和肉毒神经毒素作者：Chu Youqing, Wang Xiwei, Hua Yabing, et al.期刊：ACS applied bio materials (ACS Appl Bio Mater)发表时间：PMID：42413032DOI：10.1021/acsabm.6c00848PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42413032/期刊分区：Q2分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：神经疾病, 筛选平台/方法, 工程化/设计, 结构解析, 治疗应用推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

Botulinum neurotoxins (BoNTs) are the most potent biological toxins discovered to date. Rapid capture and clearance of BoNTs from the bloodstream is a critical strategy for poisoning treatment. Nanobodies, with their high affinity, represent promising molecules for neutralizing BoNTs. Due to its small molecular weight, it has the limitation of a short half-life in the bloodstream. The BoNT/A-neutralizing nanobody, ciA-C2, binds to the receptor-binding domain of BoNT/A, blocking its interaction with the neuronal receptor SV2 and thereby preventing toxin entry into cells to achieve detoxification. This study leverages the nanoscale addressability of DNA origami technology. Through complementary base pairing, the BoNT/A-neutralizing nanobody ciA-C2 is displayed on a DNA origami nanostructure (DON), constructing a DON-ciA-C2 anti-BoNT/A system with prolonged half-life and spatially cooperative multivalency. The DON, measuring approximately 120 nm in size-about 30 times larger than ciA-C2-extends the half-life of the system due to its larger dimensions. The multivalent assembly of ciA-C2 on the DNA origami creates a "high-affinity" nanoscale surface. This design leverages dense regional proximity effects to significantly enhance toxin-binding efficiency and stability. Additionally, a physical barrier effect is formed, effectively shielding the receptor-binding domain of BoNT/A and preventing the toxin from accessing receptors on the cell membrane. In a mouse model of BoNT/A poisoning at 10 times the lethal dose (10 LD50), DON-ciA-C2 significantly improved survival rates to 100% in both prophylactic and therapeutic administration regimens. Moreover, it extended the effective half-life of ciA-C2 from 4 h to approximately 32 h. By orderly assembling nanobodies on DNA origami, this study creates a biomimetic nanoscale trap with triple functions-"capture, enrichment, and sequestration"-against BoNT/A. This strategy not only provides a highly efficient neutralization paradigm for anti-BoNT/A therapy but also highlights the transformative potential of DNA origami nanostructures in reshaping protein interaction interfaces for precision medicine.

2. 摘要中文翻译

肉毒神经毒素（BoNTs）是迄今发现的最强生物毒素。快速捕获和清除血流中的BoNTs是中毒治疗的关键策略。高亲和力纳米抗体是中和BoNTs的有前景分子。但由于其小分子量，在血流中半衰期较短。BoNT/A中和纳米抗体ciA-C2与BoNT/A受体结合域结合，阻断其与神经元受体SV2的相互作用，从而阻止毒素进入细胞以实现解毒。本研究利用DNA折纸技术的纳米级可寻址性。通过互补碱基配对，将BoNT/A中和纳米抗体ciA-C2展示在DNA折纸纳米结构（DON）上，构建了具有延长半衰期和空间协同多价的DON-ciA-C2抗BoNT/A系统。DON尺寸约120 nm，约为ciA-C2的30倍，由于其较大尺寸延长了系统半衰期。DNA折纸上ciA-C2的多价组装形成了「高亲和力」纳米级表面。该设计利用密集区域邻近效应显著增强毒素结合效率和稳定性。此外，形成了物理屏障效应，有效屏蔽BoNT/A受体结合域，阻止毒素接触细胞膜上的受体。在10倍致死剂量（10 LD50）BoNT/A中毒小鼠模型中，DON-ciA-C2在预防和治疗给药方案中均显著提高生存率至100%。此外，它将ciA-C2的有效半衰期从4小时延长至约32小时。通过有序组装DNA折纸上的纳米抗体，本研究创建了一种具有「捕获、富集和隔离」三重功能的抗BoNT/A仿生纳米陷阱。该策略不仅提供了高效中和BoNT/A的通用平台，还为其他生物毒素和病原体的治疗性中和提供了新思路。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为核心，构建DNA折纸多价展示平台用于肉毒神经毒素中和。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：神经疾病、筛选平台/方法、工程化/设计、治疗应用主要方法：将抗BoNT/A纳米抗体ciA-C2通过碱基配对展示在DNA折纸上，构建DON-ciA-C2系统；评估中和活性、半衰期和体内保护效果。主要发现：DON-ciA-C2在10 LD50攻毒小鼠中预防和治疗均达100%生存；半衰期从4 h延长至约32 h；多价展示增强毒素捕获和屏蔽。潜在优势：DNA折纸提供精确空间排布，多价纳米抗体产生avidity效应和物理屏障，同时解决半衰期短和中和效率问题。关注理由：该研究将纳米抗体与DNA纳米技术结合，为生物毒素中和提供了创新的仿生纳米陷阱策略。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究利用DNA折纸多价展示抗BoNT/A纳米抗体，在10 LD50中毒小鼠中实现100%生存保护并将半衰期延长8倍，为生物毒素中和提供了仿生纳米陷阱新策略。

文献 22

英文题目： A neutralizing nanobody targeting a conserved lateral patch on HA1 confers protection against multiple H7 avian influenza viruses.中文题目：靶向HA1保守侧向片层的中和纳米抗体对多种H7禽流感病毒具有保护作用作者：Xu Siqi, Zhang Qinying, Xie Xueer, et al.期刊：Journal of virology (J Virol)发表时间：PMID：42274212DOI：10.1128/jvi.00563-26PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42274212/期刊分区：Q2分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：诊断/成像, 感染性疾病, 筛选平台/方法, 工程化/设计, 治疗应用推荐等级：★★★ A

1. 原文摘要

Human infections with H7 avian influenza viruses (AIVs) have been documented globally, involving multiple subtypes and geographic regions. However, effective therapeutics targeting H7 influenza viruses remain limited. Here, a panel of nanobodies targeting the HA1 domain of hemagglutinin (HA) was identified by yeast two-hybrid (Y2H) screening, and six candidates were subsequently validated to exhibit hemagglutination inhibition (HI) activity. Of these, a subset also displayed virus microneutralization (MN) activity, while all showed binding activity in ELISA assays. Among them, Nb74 exhibited inhibitory activity against four Chinese recombinant vaccine-matched strains (Rv1-Rv4), which were generated based on the HA sequences of the corresponding inactivated vaccine strains H7-Re1 to H7-Re4. The HI-IC50 values were 0.23, 0.57, 3.65, and 43.75 µg/mL, respectively, and the MN-IC50 values for Rv1-Rv3 were 0.02, 0.06, and 1.09 µg/mL. It also retained activity against diverse clinical isolates although HI potency varied among strains. In mouse challenge experiments, intratracheal administration of Nb74 conferred robust protection, achieving 100% and 80% survival against Rv1 and Rv2, respectively, when administered prophylactically (2 mg/kg) or therapeutically (4 mg/kg). Treated mice showed accelerated body weight recovery, reduced lung viral load, and alleviated pulmonary pathology. Mechanistic analyses indicated that Nb74 neutralizes virus by blocking viral attachment to the host. Furthermore, combined hydrogen-deuterium exchange mass spectrometry (HDX-MS) with escape mutant analysis mapped its epitope to a conserved lateral patch on the HA1 subunit, consistent with a conformational epitope. Overall, these results demonstrate the therapeutic promise of intratracheally delivered Nb74 and provide insights for H7 AIVs vaccine design.IMPORTANCEH7 avian influenza viruses (AIVs), including both low- and highly pathogenic strains, pose a persistent threat to poultry production and public health, while continuous antigenic evolution of the HA1 subunit undermines vaccine effectiveness. Broadly neutralizing agents against H7 AIVs are urgently needed for pandemic preparedness, yet nanobody-based therapeutics remain largely unexplored. In this study, we identified Nb74, a nanobody that inhibits hemagglutination and neutralizes multiple H7 strains. Importantly, intratracheal delivery of Nb74 conferred protective efficacy, supporting respiratory administration of nanobody therapeutics. Mechanistic analyses show that Nb74 blocks viral attachment by recognizing a conserved conformational epitope within a lateral patch of the HA1 subunit. These findings reveal a conserved and functionally vulnerable region on H7 hemagglutinin (HA) and support the development of nanobody-based antivirals and improved vaccine strategies against emerging H7 AIV threats.

2. 摘要中文翻译

全球已记录人感染H7禽流感病毒（AIVs）病例，涉及多种亚型和地理区域。然而，针对H7流感病毒的有效治疗药物仍然有限。本研究通过酵母双杂交（Y2H）筛选鉴定了一靶向血凝素（HA）HA1结构域的纳米抗体panel，随后六种候选物被验证具有血凝抑制（HI）活性。其中一部分还显示病毒微中和（MN）活性，所有均在ELISA中显示结合活性。其中Nb74对四种中国重组疫苗匹配株（Rv1-Rv4）表现出抑制活性，这些毒株基于相应灭活疫苗株H7-Re1至H7-Re4的HA序列产生。HI-IC50值分别为0.23、0.57、3.65和43.75 µg/mL，Rv1-Rv3的MN-IC50值分别为0.02、0.06和1.09 µg/mL。它还对多种临床分离株保持活性，尽管HI效力因毒株而异。在小鼠挑战实验中，Nb74气管内给药提供了稳健保护，在预防和治疗方案（分别为2 mg/kg和4 mg/kg）下对Rv1和Rv2分别达到100%和80%生存率。治疗小鼠显示体重恢复加速、肺部病毒载量降低和肺部病理缓解。机制分析表明Nb74通过阻断病毒与宿主附着来中和病毒。此外，结合氢-氘交换质谱（HDX-MS）与逃逸突变分析将其表位映射到HA1亚基的保守侧向片层，与构象表位一致。总体而言，这些结果证明了气管内递送Nb74的治疗前景，并为H7 AIVs疫苗设计提供了见解。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为核心，开发靶向H7禽流感病毒HA1保守表位的广谱中和纳米抗体。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：诊断/成像、感染性疾病、筛选平台/方法主要方法：酵母双杂交筛选抗HA1纳米抗体；验证HI/MN活性；小鼠H7攻毒模型评估保护效果；HDX-MS和逃逸突变分析表位。主要发现：Nb74对多种H7疫苗株和临床分离株有中和活性；小鼠预防和治疗给药均提供显著保护；表位位于HA1保守侧向片层。潜在优势：靶向保守表位使Nb74具有广谱中和潜力；纳米抗体小尺寸适合呼吸道局部给药。关注理由：该研究为H7禽流感等呼吸道病毒感染提供了候选治疗性纳米抗体和疫苗设计靶点。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究鉴定了靶向H7 HA1保守侧向片层的广谱中和纳米抗体Nb74，在小鼠攻毒模型中通过气管内给药提供显著保护，为禽流感治疗和疫苗设计提供了新候选。

文献 23

英文题目： Highly sensitive lateral flow immunoassay for aflatoxin B1 detection based on a novel homogeneous enrichment strategy with free recognition probes.中文题目：基于新型均相酶信号放大和游离纳米抗体的高灵敏黄曲霉毒素B1侧流免疫检测作者：Yang Zheng, Zhao Yiming, Ren Kaichan, et al.期刊：Talanta (Talanta)发表时间：PMID：42472530DOI：10.1016/j.talanta.2026.130310PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42472530/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：诊断/成像, 筛选平台/方法推荐等级：★★ B

1. 原文摘要

Aflatoxin B1 (AFB1) is a highly toxic mycotoxin, harms global agriculture and human health. At present, due to the antibody inactivation caused by direct coupling and weak signal output, it is difficult for the traditional lateral flow immunoassays (LFIA) to quickly and accurately detect AFB1 on the spot. To overcome these limitations, a novel competitive LFIA biosensor was developed utilizing CuS-Au nanocomposites as colorimetric tags and a free nanobody (G8-DIG) as the recognition element. By maintaining the nanobody in a free state rather than immobilizing it, the assay effectively bypasses activity loss while simultaneously amplifying signal output. Under optimal parameters, the proposed sensor quantitatively detects AFB1 within 8 min, displaying a wide linear range of 0.51-63.3 ng/mL and a low limit of detection (LOD) of 0.26 ng/mL. Furthermore, the method showed excellent selectivity for coexisting mycotoxins and yielded satisfactory recoveries (90.0%-99.6%, CV < 7.4%) in spiked corn samples, which aligned closely with HPLC analysis (95.5%). Overall, the developed immunosensor provides a robust, sensitive, and reliable platform for the rapid point-of-need monitoring of AFB1 in food.

2. 摘要中文翻译

黄曲霉毒素B1（AFB1）是一种高毒性霉菌毒素，危害全球农业和人类健康。目前，由于传统侧流免疫分析（LFIA）中直接偶联导致的抗体失活和信号输出弱，难以在现场快速准确检测AFB1。为克服这些局限，开发了一种新型竞争性LFIA生物传感器，利用CuS-Au纳米复合材料作为比色标签，游离纳米抗体（G8-DIG）作为识别元件。通过保持纳米抗体游离状态而非固定化，该检测有效避免了活性损失，同时放大了信号输出。在最佳参数下，所提出的传感器在8分钟内定量检测AFB1，显示0.51-63.3 ng/mL的宽线性范围和0.26 ng/mL的低检测限（LOD）。此外，该方法对共存霉菌毒素表现出优异选择性，在加标玉米样品中回收率满意（90.0%-99.6%，CV < 7.4%），与HPLC分析（95.5%）高度一致。总体而言，开发的免疫传感器为食品中AFB1的现场快速监测提供了稳健、灵敏和可靠的平台。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为核心，开发用于黄曲霉毒素B1快速检测的竞争性侧流免疫传感器。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：诊断/成像、筛选平台/方法主要方法：利用游离抗AFB1纳米抗体G8-DIG作为识别元件，CuS-Au纳米复合材料作为比色信号标签，构建竞争性LFIA；优化检测性能并在玉米样品中验证。主要发现：游离纳米抗体避免失活并放大信号；8分钟完成检测；线性范围0.51-63.3 ng/mL；LOD 0.26 ng/mL；与HPLC一致性良好。潜在优势：纳米抗体稳定性好、成本低；均相酶信号放大和游离识别策略提高了LFIA灵敏度和可靠性，适合现场检测。关注理由：该研究为食品安全监测提供了一种高灵敏度、快速的纳米抗体LFIA平台，具有实际应用价值。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究开发了基于游离纳米抗体和CuS-Au纳米酶信号放大的竞争性LFIA，可在8分钟内高灵敏检测AFB1，为食品安全现场监测提供了可靠工具。

文献 24

英文题目： Amyloid-like bovine serum albumin fibrils as protein scaffold for biointerfaces.中文题目：淀粉样样牛血清白蛋白原纤维作为生物界面的蛋白支架作者：Sergentu Any Cristina, Anghelache Jessica Naomi, Chilom Claudia, et al.期刊：International journal of biological macromolecules (Int J Biol Macromol)发表时间：PMID：42468592DOI：10.1016/j.ijbiomac.2026.153592PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42468592/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：其他蛋白支架靶点：见摘要应用方向：诊断/成像, 神经疾病, 工程化/设计, 结构解析推荐等级：★★ B

1. 原文摘要

Amyloid-like protein assemblies have attracted increasing interest as bioinspired materials due to their structural stability and potential for interfacing with biological systems. In this study, the controlled conversion of bovine serum albumin (BSA) into amyloid-like fibrils and their potential use as biocompatible protein-based interfaces were investigated. The stability of BSA in different media was first evaluated by UV-Vis spectroscopy, demonstrating that the protein maintains its structural integrity over time and provides a suitable starting point for fibrillation experiments. Amyloid-like fibrils were subsequently generated under acidic and thermal conditions (pH 2 and 65 °C). A progressive decrease in α-helical content accompanied by an increase in β-sheet structures characteristic of amyloid assemblies was monitored by Furrier transform infrared (FTIR), Raman, and UV-Vis spectroscopy. The formation of fibrillar aggregates was further confirmed by Thioflavin T fluorescence analysis and atomic force microscopy (AFM), which showed the transition from globular protein aggregates to elongated fibrillar networks. AFM imaging also indicated that ionic strength influences fibril organization, with salt-containing media promoting the formation of more interconnected structures. Finally, the biological response of SH-SY5Y neuronal-like cells cultured on fibril-coated surfaces demonstrated enhanced cell attachment and spreading compared to non-modified substrates. Overall, the results highlight the potential of amyloid-like BSA fibrils as biocompatible protein-based scaffolds for the development of functional biointerfaces.

2. 摘要中文翻译

淀粉样样蛋白组装体因其结构稳定性和与生物系统界面的潜力，作为生物启发材料吸引了越来越多的兴趣。本研究调查了牛血清白蛋白（BSA）受控转化为淀粉样样原纤维及其作为生物相容性蛋白基界面的潜在用途。首先通过UV-Vis光谱评估BSA在不同介质中的稳定性，证明蛋白质随时间保持结构完整性，为纤维化实验提供了合适的起点。随后在酸性热条件（pH 2和65°C）下生成淀粉样样原纤维。通过傅里叶变换红外（FTIR）、拉曼和UV-Vis光谱监测α-螺旋含量逐渐降低伴随β--sheet结构特征性增加。硫黄素T荧光分析和原子力显微镜（AFM）进一步确认了纤维状聚集体的形成，显示从球状蛋白聚集体向 elongated 纤维网络的转变。AFM成像还表明离子强度影响原纤维组织，含盐介质促进更多互连结构的形成。最后，在纤维涂层表面培养的SH-SY5Y神经样细胞的生物学反应显示，与非改性底物相比，细胞附着和铺展增强。总体而言，结果突出了淀粉样样BSA原纤维作为开发功能性生物界面的生物相容性蛋白基支架的潜力。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以淀粉样样BSA原纤维作为蛋白支架，探索其在生物界面和细胞培养中的应用。

支架类型：其他蛋白支架应用场景：诊断/成像、神经疾病、工程化/设计主要方法：在酸热条件下将BSA转化为淀粉样样原纤维，通过光谱和显微技术表征结构变化，评估其作为细胞培养支架的生物相容性。主要发现：BSA原纤维具有典型β-sheet结构；离子强度影响原纤维网络形成；SH-SY5Y细胞在纤维涂层上附着和铺展增强。潜在优势：BSA来源广泛、成本低、生物相容性好；淀粉样样原纤维结构稳定，可作为功能性生物界面支架。关注理由：该研究展示了一种新型天然蛋白基支架材料，在神经组织工程和生物传感界面中具有潜在应用价值。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究将BSA可控转化为淀粉样样原纤维，证实其作为生物相容性蛋白支架可促进神经细胞附着和铺展，为生物界面材料开发提供了新选择。

文献 25

英文题目： Synaptic Ca2+ channels and neurexins are linked through direct and indirect binding complexes.中文题目：突触Ca2+通道与neurexins通过直接和间接结合复合物相连接作者：Hohaus Nils, Reissner Carsten, Missler Markus期刊：Scientific reports (Sci Rep)发表时间：PMID：42457853DOI：10.1038/s41598-026-62077-2PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42457853/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：OA（PMC全文）PMC ID：PMCPMC13373219PMC 全文链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMCPMC13373219/支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：神经疾病, 细胞内靶向推荐等级：★★ B

1. 原文摘要

Rapid release of neurotransmitters from presynaptic boutons is essential for brain function and is triggered by Ca2+ influx through voltage-gated calcium channels (VGCCs), which consist of an α1 pore-forming subunit, intracellular β subunits, and mostly extracellular α2δ auxiliary subunits. Neurexins (Nrxn) regulate neurotransmission and presynaptic Ca2+ influx, but the physical interactions with VGCC subunits remain unknown. Here, we examined these interactions in recombinant VGCC-Nrxn complexes using a nanobody-based co-precipitation system. We found that the α2δ-1 and α2δ-3 variants bind to the α1 pore-forming subunits of CaV2.1- and CaV2.2-type VGCCs with distinct preferences, whereas Nrxn1α and Nrxn1β do not directly interact with α1. Since Nrxn1α binds both α2δ variants but Nrxn1α/α2δ complexes do not include α1, mobile α2δ subunits may dynamically toggle between Nrxn1α and the CaV core. Additionally, Nrxn1α associates with α1 subunits independently of α2δ through the intracellular scaffold protein Mint2, which enhances Nrxn1α/α2δ complex formation by inhibiting full glycosylation of α2δ. Extracellularly shorter Nrxn1β cannot bind α2δ but can indirectly associate with CaV2 α1 pore-forming subunits via either Mint2 or CASK proteins. Therefore, our findings reveal distinct molecular complexes through which αNrxn and βNrxn variants interact with VGCC subunits to regulate presynaptic Ca2+ influx. (196 words).

2. 摘要中文翻译

从突触前末梢快速释放神经递质对大脑功能至关重要，由电压门控钙通道（VGCCs）介导的Ca2+内流触发，VGCCs由α1成孔亚基、细胞内β亚基和主要位于细胞外的α2δ辅助亚基组成。Neurexins（Nrxn）调节神经传递和突触前Ca2+内流，但与VGCC亚基的物理相互作用仍未知。本研究使用基于纳米抗体的共沉淀系统检查了重组VGCC-Nrxn复合物中的这些相互作用。我们发现α2δ-1和α2δ-3变体以不同偏好性与CaV2.1和CaV2.2型VGCCs的α1成孔亚基结合，而Nrxn1α和Nrxn1β不直接与α1相互作用。由于Nrxn1α结合两种α2δ变体但Nrxn1α/α2δ复合物不包括α1，移动α2δ亚基可能在Nrxn1α和CaV核心之间动态切换。此外，Nrxn1α通过细胞内支架蛋白Mint2独立于α2δ与α1亚基相关联，Mint2通过抑制α2δ完全糖基化增强Nrxn1α/α2δ复合物形成。细胞外较短的Nrxn1β不能结合α2δ，但可通过Mint2或CASK蛋白间接与CaV2 α1成孔亚基相关联。因此，我们的发现揭示了αNrxn和βNrxn变体与VGCC亚基相互作用以调节突触前Ca2+内流的不同分子复合物。（196词）

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为工具，研究neurexin与电压门控钙通道亚基的相互作用机制。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：神经疾病、细胞内靶向主要方法：利用纳米抗体共沉淀系统分析重组VGCC-Nrxn复合物；结合生化实验研究α2δ、Nrxn和α1亚基的相互作用模式。主要发现：α2δ变体偏好性结合CaV2.1/2.2 α1亚基；Nrxn1α通过α2δ或Mint2间接与VGCC关联；Nrxn1β通过Mint2/CASK间接关联α1。潜在优势：纳米抗体共沉淀系统可高特异性捕获膜蛋白复合物，有助于解析突触前分子组织。关注理由：该研究揭示了突触前Ca2+通道与neurexin的精细相互作用网络，对理解神经递质释放调控和相关神经疾病具有重要意义。

4. 全文精读分析

研究背景：VGCC和neurexin是突触前关键蛋白，其相互作用调控神经递质释放和突触形成，但精确分子机制长期不清。核心科学问题：neurexin如何通过直接和间接方式与VGCC亚基相互作用以调控突触前Ca2+内流？支架选择逻辑：纳米抗体可特异性识别VGCC或neurexin亚基，用于共沉淀和复合物分析，克服传统抗体交叉反应和体积大的问题。筛选与设计路线：制备/选择针对α1、α2δ和Nrxn亚型的纳米抗体；建立共沉淀系统；重组表达VGCC和Nrxn变体；分析复合物组成；验证Mint2和CASK的中介作用。关键实验和证据链：纳米抗体共沉淀；质谱鉴定复合物成员；糖基化分析；突变体验证相互作用界面。关键数据：α2δ-1/3与CaV2.1/2.2 α1偏好性结合；Nrxn1α/α2δ复合物不含α1；Mint2促进Nrxn1α/α2δ形成。主要结论：Nrxn通过多条分子路径与VGCC关联，α2δ在其中起动态连接作用。创新点：首次系统解析neurexin与VGCC亚基的直接/间接相互作用网络。局限性：主要为重组蛋白和体外实验，生理条件下复合物动态性需在体内验证。启发：为理解自闭症、癫痫等神经发育疾病的突触功能障碍机制提供分子基础。

5. 一句话评价

该研究利用纳米抗体共沉淀系统揭示了neurexin与电压门控钙通道亚基的多层次相互作用网络，为理解突触前Ca2+内流调控机制提供了重要结构基础。

文献 26

英文题目： Engineering a series of Scaffold-associated isoprenol utilization pathways to enhance terpene production spanning diverse chain lengths.中文题目：工程化一系列支架相关异戊烯醇利用途径以提高萜类产物产量作者：Liu Lijun, Shi Xiaoyu, Chen Fangyan, et al.期刊：Bioresource technology (Bioresour Technol)发表时间：PMID：42448117DOI：10.1016/j.biortech.2026.135414PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42448117/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：其他蛋白支架靶点：见摘要应用方向：筛选平台/方法, 工程化/设计, 结构解析推荐等级：★★ B

1. 原文摘要

Terpenoids are valuable resources for pharmaceutical research, yet their natural supply remains constrained. While the artificial isoprenol utilization pathway (IUP) has emerged as a promising alternative for terpene precursor supply, its full potential is limited by suboptimal pathway flux and substrate tolerance. Here, we report an efficient scaffold-assisted IUP platform tailored for high-throughput terpenoid discovery and scalable production. By recruiting rate-limiting IUP enzymes and prenyltransferases (PTs) onto self-assembling PduA* protein scaffolds displaying CC-Di-B peptides that specifically interact with CC-Di-A-tagged enzymes, we achieved spatial organization of the biosynthetic machinery. Systematic optimization of promoter configuration, fermentation conditions, and enzyme fusion yielded the optimal system ScMKI4-GS, achieving gram-per-liter-scale production (1.1 g/L) of the eunicellane-type diterpene benditerpe-2,6,15-triene in simple shake-flask fermentation-substantially outperforming scaffold-free controls. The platform demonstrated broad applicability across five structurally distinct eunicellane synthases, with each exhibiting enhanced production upon scaffold incorporation. For lycopene biosynthesis, the scaffold-assisted system produced 729.7 mg/L-a 9-fold improvement over the canonical MVA pathway under identical conditions, representing the highest IUP-based lycopene titer reported in Escherichia coli to date. Finally, by systematic substitution of chain-length-specific PTs, we expanded the platform to efficiently generate C10-C35 terpene precursors, facilitating functional characterization of terpene-related genes. Collectively, this versatile scaffold-assisted IUP platform provides a robust tool to expand terpenoid structural diversity and accelerate their scalable overproduction.

2. 摘要中文翻译

萜类是药物研究的宝贵资源，但其天然供应仍然受限。虽然人工异戊烯醇利用途径（IUP）已成为萜类前体供应的有前景替代方案，但其全部潜力受限于次优的途径通量和底物耐受性。本研究报告了一种高效的支架辅助IUP平台，专为高通量萜类发现和规模化生产量身定制。通过将限速IUP酶和异戊烯基转移酶（PTs）招募到展示与CC-Di-A标记酶特异性相互作用的CC-Di-B肽的自组装PduA*蛋白支架上，实现了生物合成机器的空间组织。系统优化启动子配置、发酵条件和酶融合产生了最优系统ScMKI4-GS，在简单摇瓶发酵中实现克每升级（1.1 g/L）的eunicellane型二萜benditerpe-2,6,15-triene产量，显著优于无支架对照。该平台在五种结构不同的eunicellane合酶中展示了广泛适用性，每种在支架整合后均表现出产量提升。对于番茄红素生物合成，支架辅助系统产生729.7 mg/L，在相同条件下比经典MVA途径提高9倍，代表了迄今报道的大肠杆菌中基于IUP的番茄红素最高产量。最后，通过系统替换链长特异性PT，我们将平台扩展至高效生成C10-C35萜类前体，促进萜类相关基因的功能表征。总之，这种多功能支架辅助IUP平台为扩展萜类结构多样性和加速其规模化过量生产提供了稳健工具。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以自组装蛋白支架为核心，工程化异戊烯醇利用途径（IUP）以提高萜类化合物产量。

支架类型：其他蛋白支架应用场景：筛选平台/方法、工程化/设计、结构解析主要方法：利用PduA*自组装蛋白支架通过CC-Di-A/B肽相互作用空间组织IUP酶和异戊烯基转移酶；优化启动子、发酵条件和酶融合；评估多种萜类合酶的产量。主要发现：支架辅助IUP使benditerpe-2,6,15-triene产量达1.1 g/L；番茄红素产量729.7 mg/L，比MVA途径提高9倍；可扩展至C10-C35萜类前体。潜在优势：蛋白支架通过空间组织提高代谢途径通量，减少中间体扩散损失，具有模块化和可扩展性。关注理由：该研究展示了合成生物学中蛋白支架在代谢工程中的应用，为萜类天然产物规模化生产提供了高效平台。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究利用PduA*自组装蛋白支架空间组织IUP代谢酶，将萜类产量提升至克每升级，为合成生物学高效生产天然产物提供了新策略。

文献 27

英文题目： Phased affinity-controlled delivery of vascular endothelial growth factor, fibroblast growth factor-2, and platelet derived growth factor enhances in vitro angiogenesis.中文题目：VEGF、FGF-2和PDGF的阶段性亲和力控制释放作者：Svendsen Justin E, Asnes Chandler L, Nightheart Samuel R, et al.期刊：Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society (J Control Release)发表时间：PMID：42447931DOI：10.1016/j.jconrel.2026.115183PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42447931/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：affibody靶点：见摘要应用方向：筛选平台/方法, 工程化/设计, 治疗应用推荐等级：★★ B

1. 原文摘要

Angiogenesis, the growth of vasculature from existing blood vessels, requires the coordinated secretion of multiple angiogenic growth factors that each stimulate the cellular recruitment, patterning, and morphogenesis inherent to vascular network formation. Among these secreted factors, vascular endothelial growth factor (VEGF), fibroblast growth factor-2 (FGF-2), and platelet derived growth factor (PDGF) amplify key stages of angiogenesis. Disruptions in their secretion have been implicated in poor vascular network formation. Current methods for exploring variations in the phased presentation of multiple different proteins are limited, which has restricted our ability to explore the effect of growth factor timing on angiogenesis. To address this knowledge gap, we developed affibodies, which are alpha-helical binding proteins, to phase the release of VEGF-165, FGF-2, and PDGF-BB from a single delivery vehicle via specific protein-affibody affinity interactions. We used yeast surface display to engineer three VEGF-, three FGF-2-, and two PDGF-specific affibodies with a wide range of affinities for their target proteins spanning dissociation constants of 3.08 ± 0.21 nM to 4550 ± 590 nM. We demonstrated that the cumulative release of VEGF and FGF-2 is inversely correlated with the strength of the protein-affibody affinity interaction and that hydrogels containing multiple protein-specific affibodies can control the release of VEGF, FGF-2, and PDGF, largely in accordance with the strength of the affinity interactions. Using a rat-derived intact microvascular fragment (MVF) model of in vitro angiogenesis, we revealed that sequential delivery of soluble VEGF, followed by FGF-2, and then PDGF enhances vascular network length by 2.8-fold and branching by 4.1-fold compared to untreated MVFs. We then designed an affibody-conjugated polyethylene glycol maleimide (PEG-MAL) hydrogel to mimic this sequence of protein delivery, resulting in a 3.0-fold increase in vascular network length and a 2.3-fold increase in vascular branching compared to all other hydrogel compositions and the sequential delivery of soluble growth factors. Changing temporal growth factor presentation with affibody-conjugated hydrogels altered the expression of key angiogenic genes involved in vessel stabilization and destabilization and matrix remodeling. Perivascular coverage measured by the colocalization of lectin and alpha smooth muscle actin staining was similar between all treatment groups, suggesting pericyte recruitment to stabilize expanded vascular networks created by the soluble and affibody-mediated delivery of the optimal sequence of proteins. Overall, this work establishes a new biomaterial platform for modulating the timing of growth factor delivery, enabling the exploration of how temporal variations in protein secretion impact regeneration and development.

2. 摘要中文翻译

血管生成，即从现有血管生长出新血管，需要多种血管生成生长因子协调分泌，每种因子刺激血管网络形成固有的细胞募集、模式和形态发生。在这些分泌因子中，血管内皮生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子-2（FGF-2）和血小板衍生生长因子（PDGF）放大血管生成的关键阶段。这些因子分泌紊乱与血管网络形成不良有关。目前探索多种不同蛋白阶段性呈现变化的方法有限，这限制了我们研究生长因子时间效应对血管生成影响的能力。为解决这一知识空白，我们开发了affibody（一种α-螺旋结合蛋白），通过特异性蛋白-affibody亲和力相互作用从单一递送载体阶段性释放VEGF-165、FGF-2和PDGF-BB。我们使用酵母表面展示工程化了三种VEGF、三种FGF-2和两种PDGF特异性affibody，对其靶蛋白的亲和力范围跨越3.08 ± 0.21 nM至4550 ± 590 nM的解离常数。我们证明VEGF和FGF-2的累积释放与蛋白-affibody亲和力相互作用强度呈负相关，含多种蛋白特异性affibody的水凝胶可控制VEGF、FGF-2和PDGF的释放，大体符合亲和力相互作用强度。使用大鼠来源的完整微血管片段（MVF）体外血管生成模型，我们揭示可溶性VEGF、随后FGF-2、然后PDGF的序贯递送使血管网络长度增加2.8倍、分支增加4.1倍，相比未处理MVF。然后我们设计了affibody偶联的聚乙二醇马来酰亚胺（PEG-MAL）水凝胶以模拟这种蛋白递送序列，导致血管长度增加3.0倍。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以affibody蛋白支架为核心，开发通过亲和力调控多种血管生长因子阶段性释放的水凝胶平台。

支架类型：affibody应用场景：药物递送、工程化/设计、治疗应用主要方法：通过酵母表面展示筛选不同亲和力的VEGF/FGF-2/PDGF affibody；将affibody偶联至PEG-MAL水凝胶；实现生长因子的阶段性释放并在大鼠MVF模型中评估血管生成。主要发现：蛋白释放与affibody亲和力负相关；序贯释放VEGF→FGF-2→PDGF显著促进血管网络形成；水凝胶平台可模拟阶段性递送。潜在优势：affibody可作为可编程亲和力调控模块，实现多种蛋白的时序性释放，无需复杂多层材料设计。关注理由：该研究展示了affibody在组织工程和再生医学中的独特应用，为血管生成和组织修复提供了精准时序控制平台。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究利用不同亲和力affibody构建了VEGF/FGF-2/PDGF阶段性释放水凝胶，在大鼠血管生成模型中显著促进血管网络形成，为组织工程中的时序性生长因子递送提供了新策略。

文献 28

英文题目： Intracellular Delivery of Peptides and Proteins with an Engineered Membrane Translocation Domain.中文题目：利用工程化膜转位结构域实现多肽和蛋白质的细胞内递送作者：Bhat Prabhat, Salim Heba, Ritchey Jeremy L, et al.期刊：ACS chemical biology (ACS Chem Biol)发表时间：PMID：42381264DOI：10.1021/acschembio.6c00383PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42381264/期刊分区：Q2分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：FN3/monobody靶点：见摘要应用方向：细胞内靶向, 工程化/设计, 治疗应用推荐等级：★★ B

1. 原文摘要

Antibodies and other protein therapeutics have revolutionized medicine, but their application is largely limited to extracellular targets. The lack of efficient intracellular delivery methods remains a major bottleneck. Here, we engineered a family of small (∼90 amino acids), metabolically stable membrane translocation domains (MTDs) by modifying the loop sequences of a human fibronectin type III (FN3) domain. The most potent variant, MTD4, is highly cell-permeable and can be recombinantly fused to the N- or C-terminus of any peptide or protein, serving as a versatile delivery vehicle. We demonstrate that MTD4 fusions efficiently deliver a wide variety of functional peptides and proteins into the cytosol and nucleus of eukaryotic cells, both in vitro and in vivo. Following systemic administration, an MTD4 fusion protein exhibited broad biodistribution and homogeneous tissue penetration in mice. Importantly, MTD4 is effective at low nanomolar (nM) concentrations, making it a promising platform for addressing a vast range of intracellular and previously ″undruggable″ targets.

2. 摘要中文翻译

抗体和其他蛋白治疗药物已经革新了医学，但其应用很大程度上局限于胞外靶点。缺乏高效的细胞内递送方法仍是主要瓶颈。本研究通过修饰人纤维连接蛋白III型（FN3）结构域的环区序列，工程化了一系列小分子量（约90个氨基酸）、代谢稳定的膜转位结构域（MTD）。最强变体MTD4具有高度细胞通透性，可通过重组方式融合至任何多肽或蛋白质的N端或C端，作为一种通用递送载体。我们证明MTD4融合蛋白可高效将多种功能肽和蛋白质递送至真核细胞的胞质和细胞核中，包括体外和体内。全身给药后，MTD4融合蛋白在小鼠中表现出广泛生物分布和均匀组织穿透。重要的是，MTD4在低纳摩尔（nM）浓度下有效，使其成为解决大量细胞内和此前"不可成药"靶点的有前景平台。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以FN3/monobody蛋白支架为核心，工程化膜转位结构域（MTD）用于蛋白质和肽的细胞内递送。

支架类型：FN3/monobody应用场景：细胞内靶向、工程化/设计、治疗应用主要方法：通过改造人FN3结构域环区序列筛选高通透性MTD；将MTD4与多种功能蛋白融合，评估体外/体内细胞摄取、亚细胞定位和生物分布。主要发现：MTD4约90个氨基酸，代谢稳定；可递送多种蛋白至胞质和细胞核；体内广泛分布和均匀组织穿透；低nM浓度有效。潜在优势：FN3来源人源化，免疫原性低；MTD4小尺寸、可基因编码、通用性强，可递送 previously undruggable 靶点。关注理由：该研究为蛋白质细胞内递送提供了新型FN3-based载体，对扩展蛋白治疗药物靶点范围具有重大意义。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究基于人FN3结构域工程化出约90个氨基酸的膜转位结构域MTD4，可高效递送多种功能蛋白至细胞内和体内，为攻克胞内不可成药靶点提供了新工具。

文献 29

英文题目： An Optonanobody for Reversible Photoactivation of Recombinant and Native α7 Nicotinic Receptors.中文题目：用于重组和天然α7烟碱受体可逆光激活的光纳米抗体作者：Vangelatou Maria, Stenbolt Kian, Bay Sylvie, et al.期刊：ACS chemical neuroscience (ACS Chem Neurosci)发表时间：PMID：42338015DOI：10.1021/acschemneuro.6c00285PubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42338015/期刊分区：Q2分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：非OA（无PMC ID）支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：神经疾病, 工程化/设计推荐等级：★★ B

1. 原文摘要

Photopharmacology, which enables the precise optical control of endogenous receptor activity, represents a powerful approach in neuroscience. However, photochromic diffusible ligands often exhibit limited subtype specificity, while alternative strategies for controlling specific receptor subtypes require genetic modification. Here, to achieve high subtype selectivity without the need of receptor engineering, we introduce a genetically independent strategy for optical control of endogenous receptors based on highly selective and chemically defined photoswitchable nanobodies. By covalently coupling a light-sensitive azobenzene agonist to a high-affinity nanobody targeting α7 nicotinic acetylcholine receptor (nAChR), we engineered MalAzoCh-C4, an optonanobody that confers reversible, light-dependent activation of native α7 receptors. In Xenopus oocytes, MalAzoCh-C4 enables wavelength-controlled modulation of recombinant α7 receptors, with enhanced activity in trans configuration. In acute hippocampal slices, application of MalAzoCh-C4 produces robust photocontrol of endogenous α7 nAChRs in interneurons, sufficient to modulate action potential firing. This strategy combines nanobody specificity with the temporal resolution of photopharmacology, establishing optonanobodies as a platform for control of native neuronal receptors.

2. 摘要中文翻译

光药理学能够精确光学控制内源性受体活性，是神经科学中的强大方法。然而，光致变色可扩散配体通常表现出有限的亚型特异性，而控制特定受体亚型的替代策略需要遗传修饰。本研究引入了一种基于高选择性和化学定义的光开关纳米抗体的、无需受体工程即可实现内源性受体光学控制的遗传独立策略。通过将光敏偶氮苯激动剂共价偶联至高亲和力靶向α7烟碱乙酰胆碱受体（nAChR）的纳米抗体，我们工程化了MalAzoCh-C4，一种可赋予天然α7受体可逆光依赖性激活的光纳米抗体。在非洲爪蟾卵母细胞中，MalAzoCh-C4能够波长控制地调节重组α7受体，反式构型活性增强。在急性海马切片中，MalAzoCh-C4的应用对中间神经元内源性α7 nAChR产生稳健的光控制，足以调节动作电位发放。该策略结合了纳米抗体特异性和光药理学的时间分辨率，确立了光纳米抗体作为控制天然神经元受体的平台。

3. 摘要层面解读

研究对象：本研究以纳米抗体（nanobody/VHH）为核心，开发光开关纳米抗体（optonanobody）用于可逆调控内源性α7烟碱受体。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：神经疾病、工程化/设计主要方法：将光敏偶氮苯激动剂共价偶联至抗α7 nAChR纳米抗体，构建MalAzoCh-C4；在卵母细胞和海马切片中验证光控受体激活。主要发现：MalAzoCh-C4以波长依赖方式可逆激活重组和天然α7受体；反式构型活性增强；可调控神经元动作电位发放。潜在优势：纳米抗体提供亚型特异性，偶氮苯提供光控开关，无需基因改造即可精确控制内源性受体。关注理由：该研究开创了光纳米抗体新工具，为神经环路研究和神经疾病治疗提供了高时空精度调控手段。

4. 全文精读分析

未进行全文分析，原因：非OA / 无法合法访问全文。

5. 一句话评价

该研究开发了光开关纳米抗体MalAzoCh-C4，可在无遗传修饰条件下可逆调控内源性α7烟碱受体，为神经科学高时空精度操控提供了新工具。

文献 30

英文题目： Translational opportunities in aptamer and nanobody lateral flow assays within the WHO REASSURED framework.中文题目：在WHO REASSURED框架内适配子和纳米抗体侧流检测的转化机会作者：Monk Evan T, McConnell Erin M, McMullin David R, DeRosa Maria C期刊：Sensors & diagnostics (Sens Diagn)发表时间：PMID：42170333DOI：10.1039/d6sd00028bPubMed 链接：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/42170333/期刊分区：Q1分区核验来源：数据来自2025年（2024JIF），ISSN/eISSN精确匹配高质量杂志参考目录OA 状态：OA（PMC全文）PMC ID：PMCPMC13188065PMC 全文链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMCPMC13188065/支架类型：nanobody/VHH靶点：见摘要应用方向：诊断/成像, 工程化/设计推荐等级：★ C

1. 原文摘要

The World Health Organization's REASSURED framework underscores the role of lateral flow assays (LFAs) in addressing diagnostic access gaps in low-resource regions affected by emerging and re-emerging pathogens, neglected tropical diseases, and diseases of unknown etiology. While antibody-based LFAs dominate clinical use, aptamers and nanobodies have emerged as alternative recognition elements with favorable stability, reproducibility, and manufacturing characteristics. This review examines the analytical performance of aptamer- and nanobody-based LFAs across infectious and immune-mediated disease contexts and situates these systems within the diagnostic development landscape. Across disease settings, analytically robust performance comparable to antibody-based formats is routinely demonstrated under controlled conditions. However, comparative analysis reveals a persistent disconnect between analytical feasibility and progression into standardized clinical validation and deployment. Translational outcomes are more often constrained by specimen access, comparator definition, manufacturing readiness, and regulatory precedent than by limitations in binder affinity or assay chemistry. These findings indicate that for researchers developing next-generation LFAs, analytical optimization alone is insufficient; successful translation increasingly depends on alignment with validation, manufacturing, and deployment frameworks that govern diagnostic evaluation.

2. 摘要中文翻译

世界卫生组织REASSURED框架强调了侧流检测（LFAs）在解决受新兴和再发病原体、被忽视热带病和病因不明疾病影响的资源匮乏地区诊断可及性差距中的作用。虽然基于抗体的LFAs在临床使用中占主导地位，但适配子和纳米抗体作为替代识别元件出现，具有有利的稳定性、可重复性和生产特性。本综述考察了适配子和纳米抗体LFAs在感染性和免疫介导疾病背景中的分析性能，并将这些系统置于诊断开发格局中。在各种疾病环境中，在受控条件下 routinely 证明可与抗体基形式相媲美的稳健分析性能。然而，比较分析揭示了分析可行性与进入标准化临床验证和部署之间的持续脱节。转化结果更多受标本获取、对照定义、生产准备和监管先例限制，而非结合物亲和力或检测化学限制。这些发现表明，对于开发下一代LFAs的研究人员，仅分析优化不足够；成功转化越来越依赖于与诊断评估的验证、制造和部署框架的一致性。

3. 摘要层面解读

研究对象：本综述以适配子和纳米抗体（nanobody/VHH）为替代识别元件，讨论其在侧流检测中的转化机会和挑战。

支架类型：nanobody/VHH应用场景：诊断/成像、工程化/设计主要方法：系统综述适配子和纳米抗体LFAs在感染性和免疫介导疾病中的分析性能、转化障碍和REASSURED框架契合度。主要发现：适配子和纳米抗体LFAs在分析性能上可与抗体媲美；但临床转化受标本获取、对照定义、生产准备和监管限制。潜在优势：纳米抗体稳定性高、生产可重复、成本低，适合资源匮乏地区的POC诊断。关注理由：该综述从转化医学角度审视纳米抗体诊断应用，强调从分析优化向验证、制造和部署框架对齐转变的重要性。

4. 全文精读分析

研究背景：LFAs是全球健康诊断的重要工具，但传统抗体在稳定性、成本和供应链方面存在局限。适配子和纳米抗体作为替代识别元件受到关注。核心科学问题：适配子和纳米抗体LFAs在转化为标准化临床诊断产品过程中面临哪些关键障碍？支架选择逻辑：纳米抗体具有热稳定性高、可酵母/细菌表达、批次可重复等优势，适合资源有限地区的POC诊断开发。主要内容：综述了HIV、疟疾、登革热、COVID-19等疾病中适配子和纳米抗体LFAs的性能；分析了REASSURED标准（实时、简易、负担得起、敏感、特异、用户友好、快速、无设备、可交付）的满足情况。关键发现：分析性能常可与抗体形式相当；但临床验证、监管批准、制造规模化和实地部署是主要瓶颈。主要结论：纳米抗体/适配子LFAs的成功转化需要超越分析优化，整合验证、制造和部署策略。价值：为开发者和资助者提供了纳米抗体诊断产品转化的系统视角。局限性：作为综述，主要基于已发表文献，未提供新的实验数据。启发：未来纳米抗体诊断研究应早期考虑临床验证路径和监管要求，以提高转化成功率。

5. 一句话评价

该综述系统分析了纳米抗体和适配子侧流检测在资源匮乏地区诊断中的分析性能和转化障碍，强调实现临床部署需超越分析优化、对齐验证和制造框架。

三、本周重点趋势总结

1. 支架类型分布

• nanobody/VHH：22 篇
• affibody：5 篇
• 其他蛋白支架：2 篇
• FN3/monobody：1 篇

2. 应用方向热点

• 肿瘤治疗：14 篇
• 诊断/成像：14 篇
• 工程化/设计：13 篇
• 筛选平台/方法：10 篇
• 神经疾病：6 篇
• 细胞内靶向：5 篇
• 感染性疾病：4 篇
• 药物递送：3 篇
• 治疗应用：3 篇
• CAR/细胞治疗：2 篇

3. 本周趋势洞察

靶向蛋白降解成为纳米抗体应用新高地：本周 3 篇高质量文献将纳米抗体与蛋白降解技术结合——Nab-TAC靶向HBV HBsAg、EGFR纳米抗体递送RIBOTAC降解miR-21、多表位纳米抗体诱导EGFR溶酶体降解克服TKI耐药。纳米抗体作为靶向模块与PROTAC/RIBOTAC/溶酶体降解融合，显著扩展了可及靶点空间。

纳米抗体CAR-T向实体瘤和细胞内抗原延伸：GCC靶向纳米抗体CAR-T在晚期结直肠癌的I期临床数据（ORR 33%）提供了实体瘤概念验证；PRAME/HLA-A2 TCR样纳米抗体CAR-T则突破了CAR-T只能识别表面抗原的限制，为AML等血液肿瘤提供了新靶点。

放射性配体治疗与诊疗一体化持续活跃：抗FAP VHH的PET成像系统比较了单体/二聚体/Fc融合的药代动力学；211At标记单域抗体用于黑色素瘤靶向α治疗的多组学机制解析；工程化affibody实现了无螯合剂放射性金属标记。纳米抗体/affibody在核医学中的工程化优势进一步凸显。

工程化益生菌与吸入递送拓展给药范式：口服EcN分泌抗TNF-α纳米抗体治疗IBD、saRNA-LNP肺部递送表达SARS-CoV-2纳米抗体，展示了纳米抗体在局部活体生物治疗和核酸递送中的新场景。

affibody模块化设计在神经疾病和材料科学中展现潜力：双表位affibody高亲和力阻断sortilin以提升PGRN、EGFR affibody偶联铁蛋白纳米笼双受体靶向胶质瘤、无螯合剂放射性标记和阶段性生长因子释放水凝胶，体现了affibody作为非免疫球蛋白小型支架的多功能性。

4. 值得关注的靶点、团队与技术路线

• 靶点：FAP（肿瘤基质）、GCC（结直肠癌CAR-T）、PRAME/HLA-A2（AML TCR样CAR-T）、EGFR（RIBOTAC/多表位降解）、sortilin（额颞叶痴呆）、TNF-α（IBD益生菌）、HBsAg（Nab-TAC抗病毒）、miR-21（胰腺癌RNA降解）
• 技术路线：Nab-TAC靶向降解、DNA折纸多价展示、SpyCatcher/SpyTag蛋白偶联、无螯合剂放射性金属标记、saRNA-LNP肺部递送、工程化益生菌活体生物治疗
• 值得追踪：纳米抗体介导的RNA降解与病毒蛋白降解、affibody诊疗一体化、FN3膜转位结构域细胞内递送

四、待核验或排除文献

以下文献因期刊分区无法核验或不满足纳入标准，未列入正式推荐清单：

此外，以下文献因主题不符被排除：

五、最终质量检查